miRNA QPCR檢測

服務介紹：

熒光定量PCR是通過熒光染料(SYBR Green)或熒光標記的特異性的探針,，對PCR產物進行標記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應過程,，結合相應的軟件可以對產物進行分析,，計算待測樣品模板的初始濃度?？梢杂糜跈z測miRNA的基因表達水平,。

　實驗流程：

取材-RNA提取逆轉錄成cDNA-miRNA引物設計合成-QPCR擴增-數據分析-發(fā)報告

miRNA采取特異性逆轉錄，默認采用莖環(huán)法,，如需使用加尾法請?zhí)崆案嬷?/p>

送樣運輸要求：

1. 樣品處理

a) 動物組織：常規(guī)組織100mg,，脂肪組織，結締組織,，纖維化組織適當增加。將組-織剪切成合適大小后（建議組織塊長寬高均不大于0.5 cm）,，然后迅速完-全浸泡于5～10倍體積的RNAsolidTM試劑中,。（注意：已浸入RNAsolidTM試劑中的組織經平衡一段時間后，可從溶液中取出,，切成更小的組織塊,，再重新放回RNAsolidTM試劑中；有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等,，不適合用RNAsolidTM試劑進行RNA保護,。）

b) 植物組織：新鮮的葉、果肉,、種子等最少100 mg,。將嫩葉，嫩莖組織切成合適的大?。ńㄗh長寬高均不大于0.5 cm）后,，然后迅速完-全浸泡于5～10倍體積的RNAsolidTM試劑中。（注意：某些植物組織天生具有的屏障，如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolidTM試劑的滲透,，對于此類組織,，通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。）

c) 細胞等樣本：收集不少于10^6個細胞沉淀（用PBS清洗1-2次）,，干冰運輸,。

d) 酵母、細菌等樣本：離心棄上清,，收集一定量的菌體沉淀,，干冰運輸。

e)全血：最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管,，干冰運輸,。

f)血清或血漿：最少1 mL，干冰運輸,。

g) RNA樣品： OD260/280為1.8-2.0,，濃度≥100 ng/μL，體積≥20μL,，干冰運輸,。

h)cDNA（必須能檢測miRNA基因）：cDNA原液≥20 μL，干冰運輸,。 

2. 樣品保存及運輸

加入有RNAsolidTM試劑的樣本可在37℃保存1～2天,，2天以后部分組織中的RNA會開始降解。室溫（25℃）穩(wěn)定保存1周,，不會有明顯的RNA降解發(fā)生,。大部分樣品置于RNAsolidTM試劑中，4℃條件下可穩(wěn)定保存1個月,，不會有明顯的RNA降解發(fā)生,。長期存放可先將保存在RNAsolidTM試劑中的樣本4℃浸透過夜，然后將RNAsolidTM試劑吸出棄去,，再將樣本放入-20℃或-80℃長期穩(wěn)定保存3～5年,。