RNA提取逆轉(zhuǎn)錄

服務(wù)介紹：

細胞中的RNA可分為信使RNA,、轉(zhuǎn)運RNA和核糖體RNA三大類,，不同組織總RNA提取實質(zhì)就是將細胞裂解，釋放出RNA,，并通過不同方式去除蛋白,、DNA等雜質(zhì),，最終獲得高純RNA產(chǎn)物的過程。再在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下,，隨機引物,、oligo(dT)或基因特異性引物的引導(dǎo)下合成互補的DNA (complementary DNA，cDNA),。 

實驗流程：

取材-RNA提取-測濃度-逆轉(zhuǎn)錄成cDNA 

其中mRNA,、lncRNA、circRNA為普通逆轉(zhuǎn)錄,；

miRNA采取特異性逆轉(zhuǎn)錄(需提供基因名稱和種屬,，方便設(shè)計引物用于特異性逆轉(zhuǎn)錄 )，默認做莖環(huán)法的逆轉(zhuǎn)錄,，如需做加尾法逆轉(zhuǎn)錄請?zhí)貏e備注說明,。

送樣運輸要求：

1. 樣品處理

a) 動物組織：常規(guī)組織100mg，脂肪組織,，結(jié)締組織,，纖維化組織適當(dāng)增加。將組-織剪切成合適大小后（建議組織塊長寬高均不大于0.5 cm）,，然后迅速完-全浸泡于5～10倍體積的RNAsolid™試劑中,。（注意：已浸入RNAsolid™試劑中的組織經(jīng)平衡一段時間后，可從溶液中取出,，切成更小的組織塊,，再重新放回RNAsolid™試劑中；有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等,，不適合用RNAsolid™試劑進行RNA保護,。）

b) 植物組織：新鮮的葉、果肉,、種子最少100 mg,。將嫩葉，嫩莖組織切成合適的大?。ńㄗh長寬高均不大于0.5 cm）后,，然后迅速完-全浸泡于5～10倍體積的RNAsolid™試劑中。（注意：某些植物組織天生具有的屏障,，如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolid™試劑的滲透,，對于此類組織，通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透,。）

c) 細胞等樣本：收集不少于10^6個細胞沉淀（用PBS清洗1-2次）,，干冰運輸。

d) 酵母、細菌等樣本：離心棄上清,，收集一定量的菌體沉淀,，干冰運輸。

e)全血：最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管,，干冰運輸,。

f)血清或血漿：最少1 mL，干冰運輸,。

g)RNA樣品： OD260/280為1.8-2.0,，濃度≥100 ng/μL，體積≥20μL,，干冰運輸,。 

2. 樣品保存及運輸

加入有RNAsolid™試劑的樣本可在37℃保存1～2天，2天以后部分組織中的RNA會開始降解,。室溫（25℃）穩(wěn)定保存1周,，不會有明顯的RNA降解發(fā)生。大部分樣品置于RNAsolid™試劑中,，4℃條件下可穩(wěn)定保存1個月,，不會有明顯的RNA降解發(fā)生。長期存放可先將保存在RNAsolid™試劑中的樣本4℃浸透過夜,，然后將RNAsolid™試劑吸出棄去,，再將樣本放入-20℃或-80℃長期穩(wěn)定保存3～5年。