所有產(chǎn)品僅供科研使用,，不能用于食用和醫(yī)療等

大鼠D-乳酸(D-Lactate)ELISA試劑盒

使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍： 48T

30μg/L -1000μg/L

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清樣本中 D-乳酸(D-Lactate)含量,。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠 D-乳酸(D-Lactate)水平,。用純化的大鼠 D-

乳酸(D-Lactate)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入 D-乳酸

(D-Lactate),，再與 HRP 標(biāo)記的 D-乳酸(D-Lactate)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，

經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下

轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的 D-乳酸(D-Lactate)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波

長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠 D-乳酸(D-Lactate)濃度,。 試劑盒組

成

1 20 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 3ml×1 瓶

2 酶標(biāo)試劑 3ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（2000μg/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶標(biāo)包被板 12 孔×4 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 3ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯色劑 A 液 3ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑 B 液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

大鼠D-乳酸(D-Lactate)ELISA試劑盒標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能

馬上進(jìn)行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

1000μg/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

500μg/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

250μg/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

125μg/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

62.5μg/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，

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然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。

4. 配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去,，如此

重復(fù) 5 次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

操作程序總結(jié)：

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，

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即為樣品的實際濃度,。

大鼠D-乳酸(D-Lactate)ELISA試劑盒注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間

控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值

大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計

算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。 保存條

件及有效期 1．試劑盒保存：,；2-8℃。

2．有效期：6 個月