骨組織ALP+TRAP雙重染色

服務(wù)介紹：

骨組織使用堿性磷酸酶（ALP）進(jìn)行染色可明確成骨細(xì)胞的成骨潛能,，使用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色可明確破骨細(xì)胞的骨吸收能力,。通過對(duì)這兩種特異性標(biāo)志酶（ALP/TRAP）的同時(shí)檢出,，可以分析骨相關(guān)細(xì)胞的分化及骨組織的生長(zhǎng)情況。

實(shí)驗(yàn)采用偶氮偶聯(lián)法來顯示堿性磷酸酶（ALP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的活性,，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下,，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸酯水解，釋放出磷酸與萘酚,，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色（藍(lán)色）產(chǎn)物,，以此證明堿性磷酸酶（ALP）的定位。在酸性條件下,，酸性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸酯水解,，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色（紅色）產(chǎn)物,，以此證明抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的定位,。ALP藍(lán)色陽(yáng)性信號(hào)和TRAP紅色陽(yáng)性信號(hào)，紅藍(lán)色對(duì)比鮮明,，可清楚同時(shí)顯示成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞的分布及含量的變化,。

實(shí)驗(yàn)大體流程：

骨組織PFA 4℃固定保存一周內(nèi)（24h-48h最佳）——骨組織用我司EDTA脫鈣液4℃低溫脫鈣——脫水浸蠟包埋石蠟切片——石蠟切片脫蠟至水——提前配制過濾的ALP染色液染色——水洗——提前配制過濾的TRAP染色液染色——烘箱烤片——中性樹膠封片。

結(jié)果判讀：

骨組織沿骨膜內(nèi)整齊排列的矮柱狀成骨細(xì)胞呈藍(lán)色,，軟骨處和骨小梁邊緣呈藍(lán)色,，破骨細(xì)胞呈酒紅色或者淺紅色，細(xì)胞核呈綠色。

送樣運(yùn)輸要求：

1,、做骨組織ALP+TRAP雙重染色需要用PFA 4℃固定保存運(yùn)輸,，固定一周內(nèi)脫水包埋切片染色。室溫固定數(shù)小時(shí)就會(huì)影響酶活,，4℃固定超過一周也會(huì)影響酶活,，導(dǎo)致陽(yáng)性減弱甚至丟失。

2,、染ALP+TRAP雙重染色的骨組織需要使用我司EDTA脫鈣液4℃低溫脫鈣,。其他脫鈣液脫鈣的組織，不保證染色結(jié)果,。用酸性脫鈣液脫鈣的骨組織,，酶失活陽(yáng)性丟失。建議在我司進(jìn)行骨組織的全套脫鈣制片和染色,。

3,、不脫鈣骨組織前期樣本制片處理方式對(duì)ALP酶活影響較大，不脫鈣骨組織切片和切磨片目前不建議做此染色,。