產(chǎn)品名稱：小鼠甲狀腺素（T4）ELISA檢測試劑盒

英文名稱：Mouse T4 ELISA Kit

貨號：XFM20716

規(guī)格：48T/96T

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

用途：本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿,、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中小鼠甲狀腺素（T4）的含量,。

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被小鼠甲狀腺素（T4）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠甲狀腺素（T4）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。

樣品收集,、處理及保存方法

以下只是列出樣品采集的一般指南,。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑,。

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜,，然后1000×g離心20 分鐘,，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

4.  組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組-織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融,。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,，取上清檢測。

注：標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

注：

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：64,、32、16,、8,、4、0 ng/mL

2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),，實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,，可用樣本-稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。

操作注意:

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑,。所有液體組分使用前充分搖勻。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值,。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果,。

6. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射,。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體,。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果樣本可能傳播疾病,，所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。

試劑的準(zhǔn)備

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。

2. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次。

2.  自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min,，洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本50μL,，空白孔不加,。樣本不足的情況下，上樣量最少10μL,。操作方法：待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本-稀釋液40μL。

4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計算:

以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到回歸方程,，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度。

試劑盒性能

1.  檢測范圍：2 ng/mL - 64 ng/mL,。

2.  靈敏度：最-低檢測濃度小于0.1 ng/mL,。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,，板間變異系數(shù)小于15%

其他注意事項(xiàng):

1. 最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性,、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份,。

2. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,，不能混用其他制造商或者不同批次的產(chǎn)品。嚴(yán)格遵守試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明才會得到最佳的檢測結(jié)果,。

3. 本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,，預(yù)留充足的樣本,。

4. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

5. 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,，因該類樣本干擾因素較多,，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量,、采樣時間等,，所以可能存在檢測不出的情況。

6. 某些天然蛋白或重組蛋白,，包括原核及真核重組蛋白,，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,，而不被檢測出。

操作安全須知:

1) 所有的化學(xué)試劑理應(yīng)被認(rèn)為具有潛在危害,任何的操作都必須提前做好實(shí)驗(yàn)防護(hù),。在操作試劑盒或處理樣本的區(qū)域請不要飲食,。

2) 推薦只有經(jīng)過良好實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)的工作人員方可操作本試劑盒。操作時請佩戴合適的防護(hù)設(shè)施,，例如白大衣,、實(shí)驗(yàn)手套、安全眼鏡等,。

3) 請不要讓試劑或樣本接觸皮膚,、眼睛和粘膜等身體部位。如不慎接觸,，請立即用大量清水清洗,。

4) 試劑盒中的終止液為酸性溶液，在使用終止液時,，請佩戴防-護(hù)服,，做好防護(hù)眼睛、手及面部等的措施,。 

5)檢測必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定,，嚴(yán)格防止交叉污染,，所有樣品,、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)定進(jìn)行處置，嚴(yán)禁隨意丟棄,。

6)試劑盒的液體組分中,，含有防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng),，避免吸入煙霧或與皮膚接觸,。底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,，避免吸入煙霧,。戴上防護(hù)手套，實(shí)驗(yàn)完成后徹-底洗手,。

免責(zé)聲明

1.   試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.   嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液量及順序進(jìn)行操作,，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作,，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

小鼠甲狀腺素（T4）ELISA檢測試劑盒