液體樣本甘油酶法測定試劑盒
描述：甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物,。脂蛋白酯酶能夠水解血
液中的甘油三酯,；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯,；激素
敏感脂肪分解酶能夠水解脂肪細(xì)胞中的甘油三酯,。與游離脂
肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測指標(biāo)，
但檢測更加方便,。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法與經(jīng)典的
GPO-Trinder 酶學(xué)反應(yīng)方法,，通過比色測定液體樣本中的甘
油含量。經(jīng)過優(yōu)化后,，操作步驟更加簡單,，檢測線性范圍在
10-1200µmol/L，可靠性和重復(fù)性俱佳,，適合生物醫(yī)學(xué),、食
品實(shí)驗(yàn)室檢測。
原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油,，
再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化氫,；在過氧化物酶作用
下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正
比,。
適用范圍：測定血液,、細(xì)胞培養(yǎng)基、體液,、酒類飲料中的甘
油濃度,。
組成 ：（以 250 次為例）
(1) R1 試劑 40 ml
(2) R2 試劑 10 ml
(3) 4 mmol/L 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml
4 oC 保存，6 個(gè)月有效
所需設(shè)備：酶標(biāo)儀,、生化分析儀或 721,、722 型可見光分光
光度計(jì)。最佳工作波長 550nm,，如無此波長建議優(yōu)先選用
570nm,、次選 530、490nm,。
一 樣本處理：
1. 酒類,、飲品、清澈液體樣本：可直接進(jìn)行測定,，如超過
線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后再進(jìn)行測定,。
2. 培養(yǎng)液：取不含酚紅、無顏色,、無血清的細(xì)胞培養(yǎng)基,，
如有細(xì)胞碎片應(yīng) 4oC,，12,000g 離心 5min,取上清進(jìn)行測
定,。
3. 血液：對(duì)于新鮮抗凝血而言,，可 4oC，2,000g 離心 5min
得到血漿,；而對(duì)于非抗凝血來說,，可先 4oC 靜置 2h 得
到血清后,，2000g 離心 10min,除去血細(xì)胞。將得到的血
漿/血清 70oC 加熱 10 分鐘滅活內(nèi)源脂肪酶,，12,000g
離心 10min ,去上清進(jìn)行測定或-20oC 保存,。
二 工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 試劑 R1 與 1 ml 試
劑 R2 混合即可,，立即使用或 4oC 保存<1 天,，變色棄去。
三 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用蒸餾水,、生理鹽水或與樣品緩沖液一致
的液體,，將 4 mM 甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋為 1000、500,、
250,、125、62.5,、31.25,、15.625、7.8125 µmol/L,，通常
取其中 4~6 管即可,，注意設(shè)置 0 濃度對(duì)照反應(yīng)管。
四 甘油濃度測定：
1. 參見下表進(jìn)行加樣,。為使反應(yīng)時(shí)間盡量一致,，減小實(shí)驗(yàn)
誤差，可先加入標(biāo)準(zhǔn)品,、待測樣品,，然后再加入工作溶
液。（注意：當(dāng)甘油濃度較低時(shí),，可將待測樣品與工作
溶液按照 100µl:100µl 體積進(jìn)行混合，然后再進(jìn)行測定,，
但是如果樣品體積超過 100µl 時(shí)將會(huì)稀釋工作液中酶
的濃度,，致使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過
線性范圍的時(shí)候,，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋,，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)
來計(jì)算樣品中甘油濃度。）
2. 37oC 或 25oC 反應(yīng) 15 分鐘,。反應(yīng)平衡后顏色在 60 分鐘
內(nèi)穩(wěn)定,。
3. 先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測定各管 OD
值,。
4. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度,。
附 Excel 作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管 OD 值為 y 軸,，標(biāo)準(zhǔn)品濃
度為 x 軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù),，點(diǎn)擊做圖向?qū)?，選
擇-散點(diǎn)圖-，點(diǎn)擊-完成-,。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一
點(diǎn),，點(diǎn)擊-添加趨勢線-，點(diǎn)擊-選項(xiàng)-,，點(diǎn)擊-顯示公式-
和-R 2值-,。
表一：
酶標(biāo)微板測定的加樣比例（檢測范圍 10-1200µmol/L）
（可對(duì)樣品和工作液比例進(jìn)行微量調(diào)整）
參考文獻(xiàn)：
1. Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145
液體樣本甘油酶法測定試劑盒
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