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大鼠內(nèi)皮素1（ET-1）ELISA試劑盒,，定量精確分析

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中內(nèi)皮素1（ET-1）含量,。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠內(nèi)皮素1（ET-1）水平,。用純化的大鼠內(nèi)皮素1（ET-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮素1（ET-1）,，再與HRP標(biāo)記的內(nèi)皮素1（ET-1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮素1（ET-1）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠內(nèi)皮素1（ET-1）濃度,。

試劑盒組成

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

大鼠內(nèi)皮素1（ET-1）ELISA試劑盒,，定量精確分析

操作步驟

1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.         加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  

4.         配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。

6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。

7.         溫育：操作同3,。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.     測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

操作程序總結(jié)：

計算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存,。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn),。