HE-染色實驗

【產品名稱】：HE染色                                                

【背景介紹】：

蘇木精-伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術里常用的染色法之一 ,。蘇木精染液為堿性 ,，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸著紫藍色 ；伊紅為酸性染料 ,，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 ,。

常規(guī)染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。它是病理技術中常用的一種方法,，通過它可以做出病理診斷和發(fā)現尋求別的輔助方法,，以達到準確，完整的病理診斷,。蘇木精染液為堿性 ,，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色 ；伊紅為酸性染料 ,，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 ,。HE染色法是組織學、胚胎學,、病理學教學與科研中基本,、使用廣泛的技術方法。

【HE染色使用說明】：

1,、細胞可做HE染色,，貼壁細胞做爬片后染色，懸浮細胞做滴片后染色,。

2,、拍照倍數分100倍,，200倍,，400倍。正常情況下拍照是200倍3張,，400倍3張,。

3,、全景掃描可看任意倍數。

【HE染色實驗步驟】：

1,、樣本組織固定與切片：首先將組織樣本進行常規(guī)的石蠟包埋,。在模具中加入液態(tài)石蠟，將待包埋的組織樣本放入石蠟中,，確保組織位置規(guī)整,。補充少許液態(tài)的石蠟后，進行降溫冷凍,，使石蠟變?yōu)楣虘B(tài)達到組織固定的效果,，然后使用石蠟切片機進行切片，厚度在４-８um左右,。將切完后的組織切片放入載玻片上使用40℃溫水浸泡使組織充分伸展,。

2、組織樣本脫蠟：將待測組織樣本切片放于二甲苯中,，充分浸泡10min,，浸泡完后更換二甲苯繼續(xù)浸泡10min，目的是使用二甲苯將切片中的石蠟溶解,，這樣可以在進行染液染色的時候,，染液可以充分進入組織種，同時,，二甲苯還可以起到透明的作用,，使切片更容易觀察。

3,、組織樣本水化：將浸泡過二甲苯的待測組織樣本先放入無水乙醇中浸泡5min,，使脫蠟時用的二甲苯可以被洗脫出去，使水可以進入組織中,；再依次置于95%,、85%、70%乙醇中各浸泡５min以達到充分水化的效果,。

4,、組織切片蘇木-素染色、分化與反藍：將水化后的組織樣本的切片使用PBS溶液浸泡清洗,，每次浸泡５min,，總共清洗３次。之后用移液槍吸取已經預先配制好的蘇木-素染色液,，每個組織切片滴加100ul,，充分染色10min。染色完畢后使用蒸餾水洗去多余的蘇木-素染色液。然后再使用1%的鹽酸乙醇進行分化,，使細胞核中結合過多的染液和細胞漿中的多余的染液被除去,。分化完成后，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈,。為了使蘇木-素染藍色,，使用弱堿性的促藍液加入組織切片中，讓細胞核染藍色,。反藍結束后先用清水進行清洗,，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。

5,、組織切片伊紅染色與脫水：向上一步驟的組織樣本切片中加入伊紅染液,，并使組織可以充分染色3min，染色完畢后,，再將組織切片進行梯度脫水,，分別使用濃度為80%、95%以及無水乙醇進行操作,。80%的乙醇脫水5s,，95%乙醇脫水2min，無水乙醇脫水2min,。

6,、組織樣本切片風干封片：將脫水后的組織樣本切片使用二甲苯浸泡２次，每次持續(xù)４min,，然后將組織樣本切片干,，并使用中性樹膠封片。

7,、最后在顯微鏡下觀察并拍照,。

HE-染色實驗