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促紅細(xì)胞生成素 (EPO)檢測試劑盒簡介
促紅細(xì)胞生成素(英文名:Erythropoietin,,簡稱:EPO)是一種調(diào)控血紅細(xì)胞制造的糖蛋白質(zhì)激素,,骨髓中血紅細(xì)胞前驅(qū)的細(xì)胞因子,。人體的促紅細(xì)胞生成素由肝臟和腎合成分泌,。嬰幼兒時期主要由肝臟合成,,成年后主要由腎臟合成,。促紅細(xì)胞生成素因為層出不窮的禁藥事件而為公眾所知。注射人工合成的紅細(xì)胞生成激素刺激劑(ESA)可以提高運動員的成績,。這種藥物與人體自身合成的促紅細(xì)胞生成素有微小的差別,,比較容易被檢測出。
促紅細(xì)胞生成素 (EPO)檢測試劑盒檢測技術(shù)簡介
雙抗體夾心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,,4℃ 過夜。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘,。(簡稱洗滌,,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,,置37℃ 孵育1小時,。然后洗滌,。(同時做空白孔,,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃ 孵育0.5~1小時,,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃ 10~30分鐘,。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號表示,。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性,。
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