人乙酰膽堿酯酶（AchE)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
40nmol/L -1200nmol/L
使用目的：
本試劑盒用于測定科研血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中乙酰膽堿酯酶（AchE)含量,。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人乙酰膽堿酯酶（AchE)水平。用純化的人乙酰
膽堿酯酶（AchE)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入乙酰膽堿
酯酶（AchE)，再與HRP 標記的乙酰膽堿酯酶（AchE)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體
復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸
的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的乙酰膽堿酯酶（AchE)呈正相關(guān)。用酶
標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中人乙酰膽堿酯酶（AchE)
濃度,。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品（2400nmol/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋,。
1200nmol/L 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
600nmol/L 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
300nmol/L 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
150nmol/L 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
75nmol/L 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，
然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去,，如此
重復(fù)5 次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行,。
操作程序總結(jié)：
計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6 個月

上海信帆生物公司主要代理產(chǎn)品：
ELISA試劑盒：進口ELISA試劑盒,國產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒,，大鼠ELISA試劑盒,，小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基：微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等,。
血清：胎牛血清,科研血清,動物血清,，NQBB,Hyclone，Gbico原裝血清 ,。
生物試劑：Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進口試劑,。
標準品對照品：進口對照品,進口對照藥材,進口標準品.
抗體：一抗,二抗，流式抗體等,。
放免代測服務(wù)：進口放免代測服務(wù),，國產(chǎn)放免代測服務(wù)，進口美國鳳凰等放免代測服務(wù),。
實驗室代測服務(wù)：放免代測,，WB實驗，免疫組化代測,，熒光定量PCR代測,，病理細胞染色代測,，生化實驗代測等。