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當(dāng)前位置:上海信帆生物科技有限公司>>公司動(dòng)態(tài)>>上海信帆生物告訴你:如何判斷胎牛血清質(zhì)量
市場(chǎng)上的胎牛血清種類繁多,,魚龍混雜,很多科研工作者,特別是剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)的人,,難以分辨血清質(zhì)量的優(yōu)劣。根據(jù)我司資深專家十多年來(lái)血清生物試劑和銷售的經(jīng)驗(yàn),,總結(jié)如下:
一,、外觀
拿到血清,zui先接觸的是血清外觀,,對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)說,,外觀的判斷尤為重要
1、顏色
根據(jù)血紅蛋白含量的不同,,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,,我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl,實(shí)際上,,血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響,,這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血,。
國(guó)產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散,,大多是由屠戶采血后馬上離心收集,所以很少會(huì)有溶血,,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,,當(dāng)然,國(guó)產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清,。
進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血,,因?yàn)檎嬲奶ヅQ迥δ懿睿t細(xì)胞容易破裂,。
總的來(lái)說,,國(guó)產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進(jìn)口的血清,,質(zhì)量的呈現(xiàn)出談黃、微紅色,,如Gibco 16000,,差點(diǎn)的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色,。當(dāng)然,,熱滅活血清或保存不當(dāng)?shù)难澹捎谘t蛋白的破壞氧化,,會(huì)呈現(xiàn)出暗紅,,甚至咖啡色,。
2,、沉淀
很多血清客戶,,會(huì)發(fā)現(xiàn)進(jìn)口血清有沉淀,從而懷疑血清的質(zhì)量問題,,這是沒有根據(jù)的,。
血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,,對(duì)血清質(zhì)量沒有任何影響,沉淀的產(chǎn)生原因很多,,和廠家的加工生物試劑方式密切相關(guān),。
國(guó)產(chǎn)的血清,,大多來(lái)自北方,,由于價(jià)格低廉,,保存環(huán)境都不好,,從采血、冷凍,、運(yùn)輸?shù)缴镌噭?huì)經(jīng)過多次凍融,,每次凍融過程,,就會(huì)析出部分纖維蛋白沉淀,這樣,,血清成品過濾后看起來(lái)反而更加的“干凈”,,很少有沉淀產(chǎn)生。
進(jìn)口的胎牛血清,,過濾分裝前很少會(huì)反復(fù)凍融,,生物試劑后的成品也是清澈的,,但隨著時(shí)間的推移,血清中的大量纖維蛋白會(huì)析出形成沉淀,。當(dāng)然,,進(jìn)口的新生牛血清,一般牛齡都在2周左右,,血清中的各種蛋白含量明顯偏高,生物試劑后血清可能會(huì)渾濁,,甚至有大量沉淀,。
當(dāng)然,,購(gòu)買回來(lái)的血清都是冰凍狀態(tài),,使用時(shí)需要融化,,融化過程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進(jìn)行,,否則沉淀相對(duì)較多,,雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量,但對(duì)細(xì)胞的顯微觀察有一定的阻礙,。
3,、澄清度
進(jìn)口胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低,,表現(xiàn)為稀薄,、清淡,,而國(guó)產(chǎn)血清,,因?yàn)榻^大多數(shù)是新生牛血清,相對(duì)而言更加粘稠,,顏色略深,,這對(duì)于初步接觸血清的人很難判斷,但把兩者進(jìn)行對(duì)比,,可容易分辨,。
二,、主要技術(shù)指標(biāo)
目前國(guó)內(nèi)血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是2005版的《中華人民共和國(guó)藥典》,主要指標(biāo)有以下幾點(diǎn):
1,、內(nèi)毒素
標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml,。內(nèi)毒素是細(xì)菌破碎后細(xì)胞壁的成分,因此內(nèi)毒素含量的高低可表現(xiàn)出采血到生物試劑一系列過程中的無(wú)菌操作情況,。目前,國(guó)產(chǎn)血清基本都能達(dá)到這一要求,,很多進(jìn)口胎牛血清內(nèi)毒素含量反而更高,,如Gibco 26140,,只要求不高于50EU/ml,高出我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)10倍,即使是16000,,也要10EU/ml,,血清質(zhì)量也未見影響,??梢?,內(nèi)毒素含量偏高不影響質(zhì)量,,除非含量*,,預(yù)示著已經(jīng)污染。
2,、總蛋白含量
胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明采血的牛齡偏大,,不是胎牛,,數(shù)值偏低,,表明血清可能摻水了。
3,、血紅蛋白
標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,,顏色越紅,數(shù)值越高,,反之,數(shù)值越低,。
4,、pH
國(guó)產(chǎn)血清,,大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,,大多低于7.5,具體原因未知,,可能和牛齡有關(guān),,這也能用來(lái)初步鑒別血清的來(lái)源。
5,、微生物
包括細(xì)菌,、霉菌、支原體,、噬菌體,、各類病原性病毒等。隨著國(guó)內(nèi)血清廠家生物試劑條件的改善提高,,細(xì)菌,、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,支原體經(jīng)過0.1um過濾,,大多也能清除,。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的,主要是生物試劑環(huán)境過程中帶入,,又無(wú)法過濾,,很難*清除,但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒,,特別是BVDV,,在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,這類微生物是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一,,而進(jìn)口胎牛血清中基本都控制的很好,。
6、免疫球蛋白
國(guó)產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè),,結(jié)果也很不準(zhǔn)確,,進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測(cè)。免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血的時(shí)的牛齡情況,,國(guó)產(chǎn)血清,,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,,IgG的含量也偏高,,進(jìn)口胎牛血清,不含IgM,,IgG的含量也較低,。
7、其它
不管是國(guó)產(chǎn)還是進(jìn)口血清,,都是不測(cè)抗生素的(無(wú)四環(huán)素胎牛血清除外),。國(guó)外,抗生素的使用很嚴(yán)格,,用量也很少,,每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的,因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國(guó)內(nèi),,抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象,,血清中殘留很高,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)極為不利,,這是國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因,。
三、血源
市場(chǎng)上的血清血源主要分為中國(guó),、北美,、南美和澳洲。
1,、國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差,,這是*的,主要原因并不是生物試劑廠家的責(zé)任,,而是天然環(huán)境差和抗生素的大量使用,。國(guó)內(nèi)環(huán)境污染嚴(yán)重,,同時(shí)飼養(yǎng)過程中抗生素極其濫用,有毒有害物質(zhì)會(huì)大量殘留在血清中,,zui終不利于細(xì)胞的生長(zhǎng),。
2、南美血清,,來(lái)源很多,,如Bioind的巴拿馬、Gibco的烏拉圭,、巴西等,,這些血清由于采血的不可控性,質(zhì)量參差不齊,,當(dāng)然,,相對(duì)于國(guó)內(nèi)血清來(lái)說好的多。另外,,國(guó)內(nèi)銷售的南美血清大多顏色鮮紅,,如Bioind、Gibco,、Hyclone等品牌,但阿根廷的血清例外,,這可能和各國(guó)的采血,、生物試劑工藝有關(guān)。
3,、北美血清,,主要來(lái)自美國(guó)和加拿大,如Hyclone的SH30396,、SH30070,、SH30071、Gibco的16000-044,、26140-079等,。這類血清,等級(jí)越高的顏色越淡,,表現(xiàn)為淡黃中帶一點(diǎn)微紅,,SH30070和SH30396對(duì)比就很明顯,特級(jí)胎牛血清基本就能進(jìn)行干細(xì)胞培養(yǎng),。北美血清還有一個(gè)顯著特點(diǎn)就是每瓶血清都能溯源,,這對(duì)一些大型的疫苗廠、藥廠尤為重要,。
4,、澳洲血清,來(lái)源主要是新西蘭和澳大利亞,這是在北美血清禁運(yùn)之后進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)的,,一般不具有溯源功能,,由于生物試劑、運(yùn)輸?shù)仍?,價(jià)格相對(duì)來(lái)說比較貴,。拿Gibco的10099和16000相比較,后者質(zhì)量等級(jí)更高,,顏色更淡,,性價(jià)比更高。
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