上海信帆生物進(jìn)行酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA試劑盒）知識(shí)培訓(xùn)

大家在做elisa實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,，難免會(huì)遇到不同的問題,，比如標(biāo)準(zhǔn)曲線不好,，試劑盒的

回收率，假陰性,，假陽(yáng)性,，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性不好等等。現(xiàn)在我們就來一一解答用戶朋友們?cè)趯?shí)驗(yàn)過程中遇到的各種疑問,！
 
曲線問題：
 
1.OD值不正常：試劑盒未回溫,，試劑盒回溫到25℃
                            溫度控制不好，控制正確溫度
                           孵育時(shí)間不準(zhǔn)確,，控制孵育時(shí)間
                          洗滌時(shí)沖擊力太大,、浸泡時(shí)間過長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增 加,，洗滌4-5次,，每孔250ul，然后拍干
                        陽(yáng)光直射,，對(duì)著風(fēng)直接吹,，避風(fēng)避光
                        酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)錯(cuò)誤，酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)450nm
                       抗體的稀釋錯(cuò)誤,，正確的稀釋抗體
                        水質(zhì)問題,，用娃哈哈礦泉水代替
 
2.白   板：洗滌液配制錯(cuò)誤，正確的配制洗滌液
             少加液體（錯(cuò)加液體）,，正確的步驟加液體
           
 
3.無 梯 度：標(biāo)準(zhǔn)品也污染,，換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板
                     OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次
                    人為點(diǎn)板,，不要點(diǎn)板/
4.線 性 不 好：OD值不正常,，控制溫度時(shí)間在做一次
                         
 
回收率：

1.空白管陽(yáng)性高：樣本本身就是陽(yáng)性樣本，換陰性樣本做回收率
                             空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染,，實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染
                           水質(zhì)原因用,，娃哈哈礦泉水代替
 
 
2.偏  高：添加量不準(zhǔn)確，的添加量
          添加濃度不適合,，添加合適的濃度
           取液吹干量多,，準(zhǔn)確的取液吹干
           取到其它相層液體,，取需用相吹干
           復(fù)溶液未稀釋或加入量少，正確的稀釋復(fù)溶液
 
3.偏  低：添加量不準(zhǔn)確,，的添加量
          添加濃度不適合,，添加合適的濃度
          取液吹干量少，準(zhǔn)確的取液吹干
           復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或加入量多,，正確的稀釋復(fù)溶液
          

 
 
假陰,、陽(yáng)性：
1，水質(zhì)原因：點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證,，用娃哈哈礦泉水代替
2,，實(shí)驗(yàn)操作原因： 吸取到其它相吹干，準(zhǔn)確的取液吹干
                  離心不*,，延長(zhǎng)離心時(shí)間
                  樣本的污染,，更換樣本
                  乳化未處理*，溫?。?0℃）處理乳化現(xiàn)象
3,，儀器試劑原因：離心管未清洗干凈，正確的洗滌器具
                  有機(jī)溶劑的影響,，做試劑空白看影響結(jié)果
4,，衍生化試劑原因（長(zhǎng)時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)）,更換衍生化試劑
5，與曲線好壞相關(guān),,，保證曲線的正常
 
 
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