細胞自噬染色檢測試劑盒用過就知道,！

產(chǎn)品說明： 

自噬(autophagy)是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質(zhì)或細胞器,，zui終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解 的過程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu),，內(nèi)含細胞質(zhì),、長壽蛋白質(zhì)和異 常蛋白聚集物，損傷或多余細胞器如線粒體,、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體,、病毒和細菌等。 單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一種熒光色素,，是嗜酸性染色劑,，通常被用于檢測自 噬體形成的特異性標記染色劑，其檢測激發(fā)濾光片波長 355nm,。阻斷濾光片波長 512nm,。細胞自噬 染色檢測試劑盒(MDC 法)，適用于培養(yǎng)細胞的自噬染色,，又稱為 MDC 染色液,，可與 EB 合用雙染。

自備材料： 

熒光顯微鏡,、低速離心機,、EB 、載玻片,、蓋玻片 

操作步驟(僅供參考)：

(一),、MDC單獨染色： 

1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer至1×,。

2,、 800g離心5min，收集細胞,，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次,，棄上清。 

3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細胞,，計數(shù)并調(diào)節(jié)細胞濃度至10 6 /ml,。

4、 取適量90μl的細胞懸液至新的EP管中,，加入10μl的MDC Stain,，輕輕混勻。

5,、 室溫避光染色15～45min,。

6、 800g離心5min,，收集細胞,，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞2次，棄上清,。

7,、 加入100μl的Collection buffer重懸細胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片,。 

8,、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長355nm，阻斷濾光片波長512nm),，計數(shù)并拍照,。

 細胞自噬染色檢測試劑盒用過就知道！

(二),、與EB雙染色：

1,、 用去離子水稀釋10×Wash buffer至1×。 

2,、 800g離心5min,，收集細胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次,，棄上清,。

3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細胞,，計數(shù)并調(diào)節(jié)細胞濃度至10 6 /ml,。

4、 取適量90μl的細胞懸液至新的EP管中,，分別加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液,，輕輕混 勻。

5,、 滴加于在玻片上,，室溫避光染色15～30min，加蓋玻片,。

6,、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長512nm)，計數(shù)并拍照,。

注意事項：

1,、 MDC Stain和EB試劑有一定毒性，請小心操作,。 

2,、 吖啶橙染色常與EB染色合用，可區(qū)分出正常細胞,、凋亡細胞及壞死細胞,。

3、 操作過程中應注意減少試劑暴露于強光下的時間,。

4,、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

 細胞自噬染色檢測試劑盒用過就知道,！