信帆生物銷售各種動物外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒,！

規(guī)格：200 mL/kit

保存：本產(chǎn)品對光敏感,，應(yīng)該室溫避光儲存，保質(zhì)期 2 年,。無菌開封后,，保存于室溫。

試劑盒組成： 

試劑A 200mL

試劑C 100mL

細(xì)胞洗滌液 200mL

紅細(xì)胞裂解液 100mL
 

操作步驟： 

1. 取新鮮抗凝全血,，血液體積小于5mL時,，在離心管中先加入4mL試劑A，后將2mL試劑C小心疊加于試劑A之上,，形成梯度界面（血液體積大于等于5mL,，試劑A與試劑C比例2：1，試劑總量與稀釋后的樣本量相等,。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二,，否則會影響分離效果）,，將血液平鋪到分離液面上方，注意保持兩液面界面清晰,。（可以使用巴氏德吸管吸取血液,，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面,。如果樣品較多，加樣的時間較長,，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?，F(xiàn)象。）

2. 室溫,，水平轉(zhuǎn)子500~1000g,，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時間越長,，*的分離條件需摸索,，離心轉(zhuǎn)速zui大不超過1200g）。

3. 離心后,，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層,，上層細(xì)胞為單個核細(xì)胞層，下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層,，如圖所示（個體差異或者是分離條件不同,，粒細(xì)胞層可分離不明顯）。

4. 用吸管小心吸取試劑C與試劑A之間以及試劑A中的中性粒細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中,，10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌細(xì)胞,。250g，離心10min（如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞裂解液）,。

5. 棄上清,，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g,，離心10min,。

6. 重復(fù)步驟6

7. 棄上清，細(xì)胞重懸備用,。

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注意事項(xiàng)： 

A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品,，為延長分離液保存時間,，請?jiān)跓o菌條件下啟封，避免
微生物污染。,。

B. 分離液使用時應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃）,，如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱,。4℃或者是
分離示意圖溫度較低的條件下離心，可能會導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重,。

C. 血液樣本為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)）,，為保持淋巴細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏,。

D. 血液樣本不需稀釋,，直接進(jìn)行分離即可。

E. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞,，不可使用含Ca,、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導(dǎo)致血細(xì)胞凝集,，
大大降低細(xì)胞得率及純度,。

F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導(dǎo)致細(xì)胞掛壁,，影響分離效果,。

G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果,，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間,，摸
索*的分離條件。

H. 如果要進(jìn)一步對分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),，那在收集血液和分離過程中,，注意無菌操作，避免微生
物污染,。

I. 不同動物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同,，用戶在制定分離液時應(yīng)提
供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細(xì)胞的名稱,。

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