小鼠內(nèi)毒素（endotoxin）試劑盒實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠內(nèi)毒素（endotoxin）水平,。用純化的小鼠內(nèi)
毒素（endotoxin）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)毒素
（endotoxin）,，再與HRP 標(biāo)記的內(nèi)毒素（endotoxin）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)
合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的
作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)毒素（endotoxin）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀
在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠內(nèi)毒素（endotoxin）
濃度,。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑6ml×1 瓶8 標(biāo)準(zhǔn)品（1.6Eu/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板12 孔×8 條9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋,。
0.8Eu/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.4Eu/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.2Eu/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.1Eu/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.05Eu/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔,、
待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，
然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去,，如此
重復(fù)5 次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行,。
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