土壤總磷/有機磷/無機磷含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
規(guī)格: 50T/24S
試劑組成和配制：
試劑一：液體 50mL×1
瓶,，4℃保存,。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用,。
試劑二：液體 11mL×1
瓶，4℃保存,。
試劑三：粉劑×1 瓶,，4℃避光保存。臨用前配制,，加入 20 mL 蒸餾水，充分溶解后加入 10 mL
試劑二,，混勻,。
標準品：液體 1mL×1 支,，40 μg/mL 無機磷標準品,，4℃保存,。
產(chǎn)品說明：
土壤總磷包括有機磷和無機磷,，其中無機磷能夠直接被植物利用,。土壤有機磷經(jīng)過礦化分解而
轉(zhuǎn)化為無機磷,。同時測定土壤總磷,、有機磷和無機磷,，可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況,。
利用鉬藍法定磷。取一份土樣,，通過浸提法測定土壤無機磷含量；另外取一份土樣,，經(jīng)高溫灼
燒后，土壤有機磷轉(zhuǎn)化為無機磷,，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機磷含量,，即可計算出有機
磷含量。
自備儀器和用品：
可見分光光度計,、臺式離心機、可調(diào)式水浴鍋,，分析天平、可調(diào)式移液器,、550℃高溫電爐，
1mL 玻璃比色皿,、蒸餾水、100 目篩子（可更?。?
操作步驟：
一,、土壤不同形態(tài)磷提取：
1.
無機磷：稱取通過 100 目篩子的風干土樣 0.1g,，轉(zhuǎn)移到
10 mL 離心管,，加入 10mL 試劑一,，
震蕩混勻,，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm,，25℃離心
10min,，取上清液一,，用于無機磷含量
測定,。
2.
總磷提取：取通過 100 目篩子的風干土樣,，550℃灼燒 1h,，冷卻后稱取約 0.1g,，轉(zhuǎn)移到 10 mL
離心管,，加入 10mL 試劑一,，震蕩混勻,，然后置于 45℃水浴 1h,，8000rpm,，25℃,，離心 10min,，
取上清液二,，用于總磷含量測定,。
二、測定步驟：
1.
分光光度計預熱 30 min,，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零,。
2.
打開水浴鍋,，調(diào)節(jié)溫度到 40℃,。
3.
空白管：取 EP 管,，依次加入 500µL 蒸餾水,，500μL 試劑三,，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min,，
室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度,，記為 A 空白管,。
4.
標準管：取 EP 管,，依次加入 50µL 標準液,，450µL 蒸餾水,，500μL 試劑三,，混勻后置于 40℃第 2頁,，共 2 頁
水浴保溫 10min,，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度,，記為
A 標準管,。
5. 測定管：取
EP 管,，依次加入 50µL 上清液一或者上清液二,，450µL
蒸餾水,，500μL 試劑三，
混勻后置于
40℃水浴保溫 10min,，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm
測定吸光度，記為 A 測
定管,。
注意：空白管和標準管只需測定一次。
三,、土壤磷含量計算：
1.
土壤無機磷含量（μg /g）=[C 標準液×(A 測定管－A 空白管)÷(A
標準管－A 空白管)]×V
總÷W =400×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)÷W
C 標準液：40μg/ml,；W：土壤樣品質(zhì)量,，g；V 總：上清液一總體積,，10 mL,。
2.土壤總磷含量（μg /g）=[C 標準液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]×V 總÷
W=400×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A
空白管)÷W
C
標準液：40μg/ml,；W：土壤樣品質(zhì)量，g,；V
總：上清液二總體積，10 mL,。
3.
土壤有機磷（μg /g）=土壤總磷-土壤無機磷
注意事項：
試劑三配制過程中,，可能會產(chǎn)生黑色固體,，其不影響結果，注意吸取時不要將黑色固體吸入,。
