檢測范圍： 96T
6pg/ml- 220pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中硬骨素(SOST)含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠硬骨素(SOST)水平,。用純化的小鼠硬骨素
(SOST)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入硬骨素(SOST),，再
與 HRP 標記的硬骨素(SOST)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后
加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃
色,。顏色的深淺和樣品中的硬骨素(SOST)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度
（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中小鼠硬骨素(SOST)濃度,。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（400pg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操
作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋,。
200pg/ml 5 號標準品 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
100pg/ml 4 號標準品 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
50pg/ml 3 號標準品 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
25pg/ml 2 號標準品 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
12.5pg/ml 1 號標準品 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,，
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然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡
量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復 5 次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。