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中級(jí)會(huì)員 | 第13年

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蛋白實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的問(wèn)題

時(shí)間:2019-3-29閱讀:365
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蛋白實(shí)驗(yàn)中的常見(jiàn)問(wèn)題

1,、蛋白樣品不能反復(fù)凍融;

2,、蛋白樣品應(yīng)加蛋白酶抑制劑,,以增加蛋白的穩(wěn)定性,;

3,、細(xì)胞水平要做 Western Blot,一般地 5×106 個(gè)細(xì)胞提取的蛋白夠就足 Western Blot,;

4,、如果目標(biāo)蛋白是膜蛋白和胞漿蛋白,所用的去垢劑就要溫和得多,,建議提取后加上 NaF 去抑制磷酸化酶的活性,;

5、若轉(zhuǎn)膜不*,,可以加大上樣量,,還有轉(zhuǎn)移時(shí)你可以用降低電流延長(zhǎng)時(shí)間,轉(zhuǎn)膜液中甲醇的比例多加 510%,;

6,、如果上樣量超載,可以濃縮樣品,,也可以根據(jù)你的目標(biāo)分子量透析掉一部分小分子蛋白,。一般地,超載 30%是不會(huì)有問(wèn)題的,。如果已經(jīng)超了不少了,,而且小分子量的也要,可以考慮加大膠的厚度,,可以試試 1.5mm comb,;

 

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