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347次蛋白實驗中的常見問題
1,、蛋白樣品不能反復(fù)凍融,；
2、蛋白樣品應(yīng)加蛋白酶抑制劑,，以增加蛋白的穩(wěn)定性,；
3,、細(xì)胞水平要做 Western Blot,，一般地 5×106 個細(xì)胞提取的蛋白夠就足 Western Blot,；
4,、如果目標(biāo)蛋白是膜蛋白和胞漿蛋白，所用的去垢劑就要溫和得多,，建議提取后加上 NaF 去抑制磷酸化酶的活性；
5,、若轉(zhuǎn)膜不*,，可以加大上樣量,，還有轉(zhuǎn)移時你可以用降低電流延長時間，轉(zhuǎn)膜液中甲醇的比例多加 5－10％,；
6、如果上樣量超載,，可以濃縮樣品,，也可以根據(jù)你的目標(biāo)分子量透析掉一部分小分子蛋白,。一般地，超載 30％是不會有問題的,。如果已經(jīng)超了不少了,，而且小分子量的也要,，可以考慮加大膠的厚度，可以試試 1.5mm 的 comb,；
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