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682次明膠酶譜試劑盒操作注意事項(xiàng),!
1.制備聚丙烯酰胺時(shí)應(yīng)注意排除氣泡,。
2.明膠酶譜的活性受鈣離子,,鋅離子,,和PH值等因素的影響,,因此緩沖液配制應(yīng)嚴(yán)格準(zhǔn)確,盡量用超純水,,孵育溫度也掌握好,。
3.用大梳子
4.孵育液的PH在7.5-7.6,,復(fù)性的TRITON時(shí)間長了會有絮狀物,所以實(shí)驗(yàn)時(shí)盡量使用新鮮配置的,。
5.孵育的37度不要在CO2培養(yǎng)箱中,,因?yàn)闀淖兎跤旱腜H值,在普通孵箱即可,。
6.細(xì)胞樣本用PBS 5倍體積震蕩裂解,估算細(xì)胞的體積,,然后加入5倍體積的PBS,渦旋振蕩15-30s,而后靜置或低速離心.或者手動震蕩,。
7.組織或者細(xì)胞的話可以用PBS,,也可以用低滲溶液如三分之一或者四分之一的生理鹽水按照5倍體積加入后震蕩裂解細(xì)胞,離心即可,,步驟和提蛋白很相似即可,其實(shí)重點(diǎn)的步驟主要是采用低滲裂解液進(jìn)行裂解,,組織的話可以勻漿20-30次,然后10000轉(zhuǎn)左右離心,,5分鐘取上清即可,。
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