乳糖含量試劑盒說明書
HPLC 法 50 管/48 樣
測定意義：
乳糖存在于哺乳動物的乳汁中,，一分子乳糖消化可得一分子葡萄糖和一分子半乳糖。半乳糖
能促進腦苷脂類和黏多糖類的生成,，對幼兒智力發(fā)育具有重要作用,。
測定原理：
利用示差折光檢測器測定乳糖含量。
需自備的實驗用品：
液相色譜儀,、示差折光檢測器,、低速離心機、溶劑抽濾裝置,、超聲波清洗器,、針頭式過
濾器（水系，50 個，0.22μm）,、濾膜（水系1 個,，0.45μm）、鈣柱（Carbomix Ca-NP10,，7.8
×300 mm）,、可調(diào)式移液器、樣品瓶（50 個,，2mL）,、超純水。
試劑的組成和配制：
乳糖標準品100mg×1 支,，4℃保存,。
實驗前的準備工作：
1、將新鮮的超純水2000 mL 用0.45 μm 的水系濾膜抽濾,，以除去溶劑中的雜質(zhì),，防止堵塞
色譜柱，之后用超聲波清洗器超聲20 分鐘,，以脫去溶劑中的氣泡,。
乳糖的提取：
1,、組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：超純水體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.2 g
組織,，加入2mL 超純水），勻漿,，倒入2mLEP 管中,，8000g 4℃離心10 min，取上清液,，調(diào)
PH 值至5-9,，水系針頭式過濾器過濾后待測。
2,、液體樣品：取2mL 液體樣品,，調(diào)PH 至5-9，水系針頭式過濾器過濾后待測,。
標準品的配制：
在標準品試劑瓶中加入10mL 超純水,，配成10mg/mL 母液，將母液用超純水分別稀釋成10
mg/mL,、8mg/mL,、6 mg /mL、4 mg /mL 和2 mg /mL 的乳糖標準品溶液,。水系針頭式過濾器
過濾后待測,。
乳糖含量測定操作步驟：
1．開啟電腦、泵、檢測器和自動進樣器,，用超純水沖洗儀器,，沖洗體積為100mL，必須保
證整個線路中充滿水,，不能把有機相帶入色譜柱,。
2．安裝上色譜柱，放入柱溫箱,，設(shè)置流速0.2 mL/min,，沖洗5min后，設(shè)置柱溫為85℃,，待
溫度升到所需溫度后,，逐漸提高流速至0.6mL/min，并注意柱壓不超過zui高1000psi,。
3．設(shè)置進樣量10 μL,，流速0.6 mL/min，保留時間15min,。待流速達到0.6mL/min 后,，查看
基線。
4. 待基線穩(wěn)定后上樣檢測,，先加入標準品10 μL,，乳糖的保留時間在10min 左右，（儀器和
檢測環(huán)境不同,，保留時間有差異）,，計算不同濃度的乳糖標準品的峰面積；加入樣品10 μL,，
在相應(yīng)保留時間處檢測乳糖的峰面積,。
5. 測定結(jié)束后，調(diào)整流速為0.2mL/min,，關(guān)閉柱溫箱的加熱系統(tǒng),；待柱溫降到40℃以下，
停止流動相,。

乳糖含量的計算：
以標準品濃度（mg/mL）為橫坐標，峰面積為縱坐標計算乳糖標準曲線,。將樣品峰面積代入
標準曲線,，計算樣品乳糖含量。
注意事項：
1.CarbomixCa-NP柱的pH適用范圍是5-9,。如使用了超出上述pH范圍的流動相,，將可能對色
譜柱造成不可修復(fù)的損傷。如分析酸性樣品，則務(wù)必在進樣前對樣品進行預(yù)處理,，以保證其
pH在5-9的中性范圍內(nèi),，方可進樣。
2.標準品的濃度范圍要根據(jù)樣品中乳糖濃度確定,，樣品中乳糖的峰面積必須落在不同濃度的
乳糖標準品的峰面積之內(nèi),，該標準品稀釋倍數(shù)只是一個參考。