產(chǎn)品簡(jiǎn)介：伊文思藍(lán)染色液(0.5%)試劑盒

伊文思藍(lán)(Evans Blue)又稱偶氮藍(lán)，分子式 C34H24N6Na4O14S4,，分子量為 960.80,， CAS 號(hào)為 314-13-6。

伊文思藍(lán)屬于一種常用的偶氮染料制劑,，因其分子量大小不血漿白蛋 白相近,，而且在血液中不血漿白蛋白有很高的親和力,，因此在神經(jīng)科學(xué)研究中常被用于示蹤 觀察血腦屏障(BBB)的完整性,，也用于細(xì)胞染色區(qū)分活細(xì)胞,、死細(xì)胞，亦可測(cè)定血容量,。

伊 文思藍(lán)作研究藥物用于測(cè)定血漿和血容量,，也可作動(dòng)脈插管的定位。正常情況下血漿白蛋白 無(wú)法透過(guò)血腦屏障,，所以染色后如果神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障完整,，不血漿白蛋白結(jié)合的依文思藍(lán) 無(wú)法使其著色。相反,，如果神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障被破壞，依文思藍(lán)就可以進(jìn)入神經(jīng)系統(tǒng)并使其 著色,。在熒光波長(zhǎng) 470nm,、540nm 處有強(qiáng)峰，680 nm 處有弱峰,?？梢允褂没瘜W(xué)透析法和 比色法進(jìn)行檢測(cè)。

伊文思藍(lán)不臺(tái)盼藍(lán)都是細(xì)胞活性染料,，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性和細(xì)胞是否存活,。活 細(xì)胞丌會(huì)被染成藍(lán)色,，而死細(xì)胞會(huì)被染成淡藍(lán)色,。伊文思藍(lán)染色后，通過(guò)顯微鏡下直接計(jì)數(shù) 或顯微鏡下拍照后計(jì)數(shù),，就可以對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行比較的定量,，其中 0.5%為zui常用的 濃度?；罴?xì)胞因有外排功能而無(wú)法被伊文思藍(lán)染色,，因此可以通過(guò)此方法在顯微鏡下區(qū)分死 細(xì)胞不活細(xì)胞，但無(wú)法區(qū)分死亡不壞死,。

 伊文思藍(lán)染色液(0.5%)試劑盒產(chǎn)品組成： 
編號(hào)名稱 DK0001 StorageEvans Blue Stain(0.5%)100ml4℃ 避光使用

說(shuō)明書1 份

 自備材料：

1,、 注射器、組織勻漿器

2,、 PBS

3,、 三lv乙酸或丙酮 

伊文思藍(lán)染色液(0.5%)試劑盒操作步驟(僅供參考)：

(一)血腦屏障通透性

1、 取處理后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(以小鼠為例),，靜脈注射 Evans Blue Stain (0.5%)數(shù)秒至 1 分鐘內(nèi),， 小鼠眼睛,、皮膚出現(xiàn)藍(lán)色。0.5～1h 后處死小鼠,，取目的腦組織,。

2、 腦組織置于 1.5ml 離心管中,，加入 1ml  PBS,，  迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿,
1000g 離心 15min。

3,、 取上清,，加入等量三lv乙酸，4℃孵育 18～24h,。該步驟亦可采用如下操作: 取上清,， 按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室溫孵育 24h,。

4,、 1000g 離心 20～30 min 或 2000g 離心 15min。

5,、 取上述溶液 1～2ml,，用分光光度計(jì)測(cè) 620 nm 處吸光值(OD 值)。同時(shí)測(cè)定已知丌同梯 度的標(biāo)準(zhǔn)依文思藍(lán)的 OD 值,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)待測(cè)樣品的依文 思藍(lán)含量。

(二)活細(xì)胞染色

1,、取 100μl 重懸細(xì)胞到常規(guī) 1.5ml 或 0.5ml 離心管內(nèi),，入 100μl Evans Blue Stain 輕輕 混勻，染色 3min(染色時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng),，但丌宜超過(guò) 10min),。

2、吸取少量經(jīng)過(guò)染色后的細(xì)胞,，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。通常如果要比較地進(jìn)行定量， 每個(gè)細(xì)胞樣品至少數(shù) 500 個(gè)細(xì)胞,，數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù),。細(xì)胞存活率計(jì)算公式如下:細(xì)胞存活率＝(細(xì)胞總數(shù)－藍(lán)色細(xì)胞數(shù))/細(xì)胞總數(shù)× 

注意事項(xiàng)：

1、 Evans Blue Stain 對(duì)人體有輕微毒性,，請(qǐng)小心防護(hù),。

2、 細(xì)胞染色時(shí),，注意凋亡小體偶爾也有拒染現(xiàn)象,。

3,、 血腦屏障通透性實(shí)驗(yàn)中，Evans Blue Stain注射量應(yīng)根據(jù)丌同動(dòng)物以及動(dòng)物的重量調(diào)整,。

4,、 采用低溫冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心。

5,、 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 有效期：  6 個(gè)月   

伊文思藍(lán)染色液(0.5%)試劑盒