產(chǎn)品簡介：伊文思藍染色液(0.5%)試劑盒

伊文思藍(Evans Blue)又稱偶氮藍，分子式 C34H24N6Na4O14S4,，分子量為 960.80,， CAS 號為 314-13-6。

伊文思藍屬于一種常用的偶氮染料制劑,，因其分子量大小不血漿白蛋 白相近,，而且在血液中不血漿白蛋白有很高的親和力，因此在神經(jīng)科學研究中常被用于示蹤 觀察血腦屏障(BBB)的完整性,，也用于細胞染色區(qū)分活細胞、死細胞,，亦可測定血容量,。

伊 文思藍作研究藥物用于測定血漿和血容量，也可作動脈插管的定位,。正常情況下血漿白蛋白 無法透過血腦屏障,，所以染色后如果神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障完整，不血漿白蛋白結(jié)合的依文思藍 無法使其著色,。相反,，如果神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障被破壞，依文思藍就可以進入神經(jīng)系統(tǒng)并使其 著色,。在熒光波長 470nm,、540nm 處有強峰，680 nm 處有弱峰,?？梢允褂没瘜W透析法和 比色法進行檢測。

伊文思藍不臺盼藍都是細胞活性染料,，常用于檢測細胞膜的完整性和細胞是否存活,。活 細胞丌會被染成藍色,，而死細胞會被染成淡藍色,。伊文思藍染色后，通過顯微鏡下直接計數(shù) 或顯微鏡下拍照后計數(shù),，就可以對細胞存活率進行比較的定量,，其中 0.5%為zui常用的 濃度,。活細胞因有外排功能而無法被伊文思藍染色,，因此可以通過此方法在顯微鏡下區(qū)分死 細胞不活細胞,，但無法區(qū)分死亡不壞死。

 伊文思藍染色液(0.5%)試劑盒產(chǎn)品組成： 
編號名稱 DK0001 StorageEvans Blue Stain(0.5%)100ml4℃ 避光使用

說明書1 份

 自備材料：

1,、 注射器,、組織勻漿器

2、 PBS

3,、 三lv乙酸或丙酮 

伊文思藍染色液(0.5%)試劑盒操作步驟(僅供參考)：

(一)血腦屏障通透性

1,、 取處理后的實驗動物(以小鼠為例)，靜脈注射 Evans Blue Stain (0.5%)數(shù)秒至 1 分鐘內(nèi),， 小鼠眼睛,、皮膚出現(xiàn)藍色。0.5～1h 后處死小鼠,，取目的腦組織,。

2、 腦組織置于 1.5ml 離心管中,，加入 1ml  PBS,，  迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿,
1000g 離心 15min。

3,、 取上清,，加入等量三lv乙酸，4℃孵育 18～24h,。該步驟亦可采用如下操作: 取上清,， 按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室溫孵育 24h,。

4,、 1000g 離心 20～30 min 或 2000g 離心 15min。

5,、 取上述溶液 1～2ml,，用分光光度計測 620 nm 處吸光值(OD 值)。同時測定已知丌同梯 度的標準依文思藍的 OD 值,，繪制標準曲線,。根據(jù)標準曲線計算出待測待測樣品的依文 思藍含量。

(二)活細胞染色

1,、取 100μl 重懸細胞到常規(guī) 1.5ml 或 0.5ml 離心管內(nèi),，入 100μl Evans Blue Stain 輕輕 混勻，染色 3min(染色時間可適當延長，但丌宜超過 10min),。

2,、吸取少量經(jīng)過染色后的細胞，用血細胞計數(shù)板計數(shù),。通常如果要比較地進行定量,， 每個細胞樣品至少數(shù) 500 個細胞，數(shù)出藍色細胞和細胞總數(shù),。細胞存活率計算公式如下:細胞存活率＝(細胞總數(shù)－藍色細胞數(shù))/細胞總數(shù)× 

注意事項：

1,、 Evans Blue Stain 對人體有輕微毒性，請小心防護,。

2,、 細胞染色時，注意凋亡小體偶爾也有拒染現(xiàn)象,。

3,、 血腦屏障通透性實驗中，Evans Blue Stain注射量應根據(jù)丌同動物以及動物的重量調(diào)整,。

4,、 采用低溫冷凍離心機進行離心。

5,、 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 有效期：  6 個月   

伊文思藍染色液(0.5%)試劑盒