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471次ELISA實(shí)驗(yàn)代測(cè)之細(xì)胞樣本的裂解方法-上海信帆
細(xì)胞裂解方法
對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1. 融解RIPA裂解液，混勻,。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,，使PMSF的zui終濃度為1mM,。
2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下,，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后,，細(xì)胞就會(huì)被裂解,。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散,。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀,。如果細(xì)胞量較多,，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解,。
3. 充分裂解后,，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清,，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作,。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升,。
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