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當(dāng)前位置:上海信帆生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>上海信帆生物:如何選擇合適的蛋白酶抑制劑
即使蛋白酶對細(xì)胞功能很重要,,但你也有不想見到它們的時候,。比如,在純化蛋白質(zhì)的時候,,你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標(biāo)蛋白吧,,特別是低豐度蛋白,。如今,市場上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇,,幫助你在必要時停止蛋白酶的活性,。
為了對付細(xì)胞和組織樣品中存在的各種蛋白酶,抑制劑的選擇也在不斷增加,。目前,,主要有四種類型的蛋白酶,根據(jù)他們活性位點(diǎn)中的氨基酸命名:絲氨酸蛋白酶,、半胱氨酸蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。蛋白酶抑制劑可以特異針對一種蛋白酶,,也可以是廣譜的,。
人們通常根據(jù)抑制劑作用的蛋白酶類型,以及它們可逆或不可逆,,對蛋白酶抑制劑進(jìn)行分類,。如何選擇和使用?這似乎是一個難題,,光看名字就已經(jīng)讓人頭暈了,。下面讓我們來聽聽專業(yè)人士的建議。
從雞尾酒開始
蛋白酶抑制劑的選擇,,取決于每個用戶的個性化實驗,,不過對于裂解細(xì)胞或勻漿組織的應(yīng)用,抑制劑混合物(或者說雞尾酒)通常是個比較保險的選擇,,可阻斷不同的蛋白酶,。Abbexazui的抑制劑就是兩種混合物:Protease Inhibitor Cocktail Multipurpose以及Protease, Phosphatase & PMSF;這兩者都適用于裂解液,。“它們普遍適用,,適合許多樣品,無論是新鮮還是FFPE組織,,抑或不同的物種,,”Abbexa的Sabrina Calabressi談道。
若研究人員希望保留目的蛋白,,同時維持細(xì)胞健康,,默克密理博的Chandra Mohan也建議使用抑制劑混合物。她建議選擇針對四種蛋白酶的抑制劑,,如默克密理博的Protease Inhibitor Cocktail III,。它可抑制哺乳動物細(xì)胞和組織中的天冬氨酸、半胱氨酸和絲氨酸蛋白酶以及氨肽酶。
有時,,不那么特異的抑制劑似乎是個更好的選擇。“在裂解細(xì)胞或制備組織勻漿液時,,使用具有廣譜特異性的抑制劑,,”Mohan說。“它們應(yīng)當(dāng)快速反應(yīng),,與蛋白酶不可逆結(jié)合,,并在蛋白純化后輕松去除。”
盡管如此,,選擇困難癥還是圍繞著你,。Abbexa認(rèn)為,嘗試不同的類型是供應(yīng)商的責(zé)任,,而不是研究人員的,。這家公司建議你和供應(yīng)商交流,讓他們將利用自己的專業(yè)知識來幫你選擇,。通常,,Abbexa在了解研究人員的特定分析、樣品類型和應(yīng)用之后,,才推薦*的抑制劑,。
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