一,、目的

通過氨基酸的分離,，學(xué)習(xí)紙層析法的基本原理及操作方法,。

二、原理

紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法,。

層析溶劑由有機(jī)溶劑和水組成,。

物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置是用Rf 值(比移)來表示的：

R=原點(diǎn)到層析點(diǎn)中心的距離

原點(diǎn)到溶劑前沿的距離

在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf 值是常數(shù)。Rf 值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu),、性質(zhì),、溶劑系統(tǒng),、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸,。

三,、器材

1、層析缸① 2,、毛細(xì)管3,、噴霧器4、培養(yǎng)皿

5,、層析濾紙(新華一號(hào))

四,、試劑

1、擴(kuò)展劑

是4 份水飽和的正丁醇和1 份醋酸的混合物,。將20mL 正丁醇和5mL 冰醋酸放入分液漏斗中,，與15mL 水混合，充分振蕩,，靜置后分層,，放出下層水層。取漏斗內(nèi)的擴(kuò)展劑約5mL 置于小燒杯中做平衡溶劑,，其余的倒入培養(yǎng)皿中備用.

2,、氨基酸溶液0.5%的賴氨酸、脯氨酸,、纈氨酸,、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它們的混合液(各組份濃度均為0.5%),。各5mL

3,、顯色劑50~100mL

0.1%水合茚三銅正丁醇容液。

五,、操作

1,、將盛有平衡溶劑的小燒杯置于密閉的層析缸中。

2,、取層析濾紙(長(zhǎng)22cm,、寬14cm)一張,。在紙的一端距邊緣2~3cm處用鉛筆劃一條直線,，在此直線上第間隔2cm 作一記號(hào)如右圖。

3,、點(diǎn)樣用毛細(xì)管將各種氨基酸樣品分別點(diǎn)在這6 個(gè)位置上,，干后再點(diǎn)一次。每點(diǎn)在紙上擴(kuò)散的直徑zui大不超過3mm,。

4,、擴(kuò)展用線將濾紙縫成筒狀,，紙的兩邊不能接觸。將盛有約20mL擴(kuò)展劑的培養(yǎng)皿建迅速置于密閉的層析缸中,，并將濾紙直立于培養(yǎng)皿中(點(diǎn)樣的一端在下,，擴(kuò)展劑的液面需你于點(diǎn)樣線1cm)。待溶劑上升15~20cm 時(shí)即取出濾紙,，自然干燥或用吹風(fēng)機(jī)熱風(fēng)吹干,。

5、顯色用噴霧器均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液,，然后置烘箱中烘烤5 分鐘(100℃)或用熱風(fēng)吹干即可顯出各層析斑點(diǎn),。

6、計(jì)算各種氨基酸的Rf 值,。

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