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蛋白質(zhì)染色知多少,信帆生物為你答疑解惑

時間:2015/10/28閱讀:1625
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染色液種類繁多,各種染色液染色原理不同,,靈敏度各異,。使用時可根據(jù)需要加以選擇。常用的染色液有:

1.氨基黑10B(amino black 10B又稱為amidoschwarz 10B或naphthalene blueblack,,2B 200)氨基黑10B分子式為C22H13N6S3Na3,,MW=715,λmax=620-630nm,,是酸性染料。其磺酸基與蛋白質(zhì)反應(yīng)構(gòu)成復(fù)合鹽,,是zui常用的蛋白質(zhì)染料之一,,但對SDS-蛋白質(zhì)染色效果不好。另外,,氨基黑10B染不同蛋白質(zhì)時,,著色度不等、色調(diào)不一(有藍(lán),、黑,、棕等);作同一凝膠柱的掃描時,,誤差較大,。

2.考馬斯亮藍(lán)R250(coomassie brilliant blue R250,簡稱CBBR250或PAGE blue83)

考馬斯亮藍(lán)R250的分子式為C14H44O7H3S2Na,,MW=824,,λmax=560-590nm。染色靈敏度比氨基黑高5倍。該染料是通過范德瓦爾鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合,,尤其適用于SDS電泳微量蛋白質(zhì)染色,,但蛋白質(zhì)濃度超過一定范圍時,對高濃度蛋白質(zhì)染色不合乎Beer定律,,作定量分析時要注意這點(diǎn),。

3.考馬斯亮藍(lán)G250(簡稱CBBG250或PAGE blue G90,又名xylene brilliant cyanin G)

考馬斯亮藍(lán)G250比CBB R250多二個甲基,。MW=854,,λmax=590-610nm。染色靈敏度不如R250,,但比氨基黑高3倍,。其優(yōu)點(diǎn)是在三氯一酸中不溶而成膠體,能選擇地使蛋白質(zhì)染色而幾乎無本底色,,所以常用于重復(fù)性好和穩(wěn)定的染色,,適于作定量分析。

4.銀染色法

此法是Switzer.R.C和Merril.CR首先提出的,,它較CBB R250靈敏100倍,。但染色機(jī)制

尚不清楚,可能與攝影過程Ag+的還原相似,。其靈敏度很高,,牛血清為4×10-5μg/mm2,即清蛋白為8×10-5μg/mm2,,cyt C為1.7×10-4μg/mm2,,因此也常用于凝膠電泳蛋白質(zhì)染色。

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