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ELISA操作實驗中的樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應再次離心,。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心,。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量,。加進一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度,。加進一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
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