堿性磷酸酶顯色試劑盒檢測原理
產品描述:
本試劑盒應用于胚胎干細胞(ES)和誘導多功能干細胞(iPS)的鑒定,,以及免疫組化,、免疫印跡等實驗中的堿性磷酸酶顯色。試劑盒內的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽(BCIP)/硝基四氮唑藍(NBT)是堿性磷酸酶(AP)的常用底物之一,,BCIP在AP的催化下會被水解生成強反應性產物,,后者與硝基四氮唑藍(NBT)反應生成不溶性產物,使之呈現深藍色至藍紫色,。
操作指南:
1. AP顯色工作液的配制:
取20μl 150×NBT溶液加入到3ml堿性磷酸酶顯色反應緩沖液,,充分混合均勻,再加入30μl 100×BCIP溶液,,配置成工作液,,如需改變工作液體積,,可按相同比例適量配制,。1h內使用。
2. 顯色步驟:
a) 檢測細胞的內源性堿性磷酸酶:吸出培養(yǎng)基,,PBS潤洗3次,,加入4%多聚甲醛固定1-2min。吸出固定液,,使用TBST清洗三次,,加入顯色工作液,室溫避光孵育5-30分鐘,,顯色至預期深淺后,,用PBS潤洗1次,然后保存于PBS溶液中,,顯微鏡下觀察結果,。
b) 檢測組織切片或膜上結合的堿性磷酸酶抗體:使用洗滌液洗滌完后,,加入適量工作液,保證
完-全覆蓋樣品表面,,室溫避光孵育5-30分鐘,,顯色至預期深淺后,去除工作液,,用蒸餾水清洗1-2次終止顯色反應,。
注意事項:
工作液應現配現用,配制好的工作液在一定時間內有效,。
使用NBT時請采取必要的防護措施,。
工作液用量必需充足,保證覆蓋組織片或印跡膜,。
為獲得最佳實驗結果,,請務必優(yōu)化如樣品使用量、抗體稀釋度,、孵育時間等實驗條件,。
綜上所述,BCIP/NBT堿性磷酸酶顯色試劑盒是一種功能強大,、應用廣泛的科研工具,,能夠幫助科研工作者準確、快速地檢測和分析堿性磷酸酶的活性,。