人癌胚抗原（CEA）含量檢測(cè)原理

背景介紹：

癌胚抗原（CEA）描述了一組參與細(xì)胞粘附的高度相關(guān)的糖蛋白,。它通常在胎兒發(fā)育過(guò)程中的胃腸組織中產(chǎn)生,，但在出生前停止產(chǎn)生，所以CEA在健康成年人血液中的含量通常很低（約2-4納克/毫升）,。然而,，在某些類型的癌癥中血清水平會(huì)升高，這意味著它可以在臨床試驗(yàn)中作為腫瘤標(biāo)志物使用,。重度吸煙者的血清水平也會(huì)升高,。CEA是糖基磷脂酰肌醇（GPI）細(xì)胞表面錨定的糖蛋白，其專門的硅藻糖基化糖型可作為功能性結(jié)腸癌L-選擇素和E-選擇素配體,，可能對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散至關(guān)重要,。從免疫學(xué)角度看，它們的特征是CD66分化簇的成員,。這些蛋白包括CD66a,、CD66b、CD66c,、CD66d,、CD66e、CD66f,。

檢測(cè)原理：

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被人癌胚抗原（CEA）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,，經(jīng)過(guò)溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人癌胚抗原（CEA）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成

注：

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：40,、20,、10、5,、2.5,、1.25 ng/mL

2.  經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本50μL,，空白孔不加。樣本不足的情況下,，上樣量最少10μL,。操作方法：待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL,。

4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。