植物超氧陰離子染色液(NBT,pH7.4)操作步驟

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物組織在脅迫環(huán)境條件下會(huì)產(chǎn)生多種活性氧（ROS）,，ROS 活性非常大且極其不穩(wěn)定,，因此 ROS 的檢測(cè)通常因其最終產(chǎn)物而定,。超氧陰離子是活性氧的一種,，屬于一種含氧自由基,，能將 NBT（氮藍(lán)四唑）還原成不溶于水的藍(lán)色甲瓚化合物,，從而定位組織中的超氧陰離子,。

植物超氧陰離子染色液(NBT,pH7.4)根據(jù)上述基本原理也稱為 NBT 染色法，用于植物活組織中的超氧陰離子染色,。一般應(yīng)用于較嫩的根尖,、葉片等的整體染色，染色后有超氧陰離子聚集的部位呈藍(lán)色至深藍(lán)色,。該產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,，不用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1,、新鮮的植物葉片或根,、自來水、蒸餾水,、95%乙醇

2,、超聲波、磁力攪拌器、電子天平,、濾紙,、照相機(jī)

操作步驟(僅供參考)：

1、試劑準(zhǔn)備：將 50 mg NBT 加入到 100mL 磷酸緩沖液(pH 7.4) 中充分溶解,，即得 NBT染色工作液,，2-8℃避光保存，一月內(nèi)有效,。注：如果較難溶解,，可通過超聲、磁力攪拌等方法促溶,。

2,、樣本準(zhǔn)備：采集經(jīng)脅迫（例如重金屬）的采集植物幼苗或根尖，自來水稍洗凈,，置于濾紙上吸干多余水分,。

3、染色：將植物幼苗或根尖浸入 NBT 染色工作液中,，常溫避光浸染 2~6 h,，至陽(yáng)性部位出現(xiàn)深藍(lán)色，其余部位為淡藍(lán)色或近無色或呈植物本身的顏色即可,。（根據(jù)植物幼嫩程度,。顯色程度調(diào)整染色時(shí)間）

4、脫色：用鑷子將植物幼苗或者葉片小心取出,，浸入蒸餾水中來回漂洗 3~5 次,，置于濾紙上吸干多余水分后，浸入 95%乙醇中 40℃處理 3~16 h,，目的是脫去植株幼苗或者葉片本身的葉綠素或者淡藍(lán)色背景,，處理期間可多次更換新鮮的 95%乙醇。

5,、觀察：用鑷子取出植株幼苗或者葉片,，浸入蒸餾水中來回漂洗 3~5 次，置于濾紙上吸干多余水分后,，將樣本轉(zhuǎn)入適量 NBT 樣本保存液中浸泡 30 min 后,，隨后可取出拍照。樣本可置于該溶液中常溫保存一周,。

注意事項(xiàng)：

1,、NBT 染色工作液配制好以后需 2-8℃避光保存，一月內(nèi)使用,。存放時(shí)間過久,，會(huì)影響顯色,。

2、因任何外在因素都可能刺激植物應(yīng)激產(chǎn)生超氧陰離子,，因此植物樣本需要新鮮采集,，并盡快完成染色。建議做陰性及陽(yáng)性空白對(duì)照組,。

3,、樣本染色完成后盡快拍照保存結(jié)果。

4,、染色和脫色步驟也可參考如下建議操作：組織放入染液中,，抽真空，-0.1MPa 保持負(fù)壓20~30min,，再于室溫下靜置染色 60min,，棄染色液；加入 95%乙醇,，于 70~80℃水浴鍋脫色,，每隔 10min 換一次 95%乙醇，待樣品綠色全部褪去后可停止脫色,。

5,、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

植物超氧陰離子染色液(NBT,pH7.4)操作步驟