小鼠白細胞介素 13（IL-13）ELISA檢測試劑盒操作步驟

檢測原理

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠白細胞介素 13（IL-13）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠白細胞介素 13（IL-13）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。

樣品收集,、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后,，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡60分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用,。樣本在使用前也要在室溫平衡60分鐘,。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3.  預處理后的樣本無需稀釋,，直接取10μL加樣即可。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作,。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

操作步驟

1.  從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；

4.  隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。

小鼠白細胞介素 13（IL-13）ELISA檢測試劑盒操作步驟