Western Blot檢測服務(wù)的實驗流程

實驗流程：

蛋白提取-制膠-電泳-轉(zhuǎn)膜-封閉-一抗孵育-二抗孵育-化學(xué)發(fā)光-結(jié)果分析;

送樣運(yùn)輸要求：新鮮組織,，100mg以上,，干冰運(yùn)輸,。細(xì)胞量為5*10^6以上,，收集細(xì)胞沉淀,，干冰運(yùn)輸,。

預(yù)實驗的內(nèi)容如下：

1）確定一抗的稀釋比例和孵育時間,；

2）選擇合適的封閉液及封閉時間,；

3）調(diào)節(jié)合適的上樣量，使內(nèi)參條帶灰度值趨于一致,。

Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供（提供以下兩種圖片,，做之前需要和銷售確認(rèn)好需要哪種）

內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖,，實驗報告,，包括整個試驗流程所涉及的實驗數(shù)據(jù)和實驗步驟。如需進(jìn)行蛋白純化服務(wù),，將提供檢測報告

服務(wù)內(nèi)容：

從動物細(xì)胞,、人或者動物組織、細(xì)菌,、植物樣品中提取蛋白樣品,。

對蛋白樣品進(jìn)行半定量分析

western檢測

電泳：聚丙烯酰氨凝膠電泳分離蛋白樣品

轉(zhuǎn)膜：濕轉(zhuǎn)

抗體孵育：使用抗體檢測膜上的特定蛋白

Western blot樣本要求

客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品， 檢測目的蛋白的一抗（或由本公司代購）,。樣品要求為：

1,、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品,。

2、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml,。

3,、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。

注意事項：

對于細(xì)胞和一些微生物樣本,，可去除培養(yǎng)基后,，加裂解液制備蛋白樣品；若未能及時制備蛋白樣品,，去除培養(yǎng)基后,，將其液氮速凍后保存于-80℃（約一個月）或保存于液氮（約三個月）；運(yùn)輸時,，樣本（含培養(yǎng)基）加冰袋,，保持培養(yǎng)基低溫但不結(jié)冰，或者樣本去除培養(yǎng)基后加干冰,。

提取蛋白的樣本最好是新鮮的,，同時，以盡可能地提取有效蛋白為準(zhǔn)則,；樣本需避免反復(fù)凍融,。

所有樣本均不建議保存于-20℃。-20℃時,，組織,、細(xì)胞內(nèi)的水會結(jié)晶，細(xì)胞活性和組織微觀結(jié)構(gòu)會受到傷害,，生物大分子受到組織,、細(xì)胞內(nèi)多種因素的影響，穩(wěn)定性可能會明顯降低,，但部分純化的大分子可以短中期保存,。

 -80℃保存條件時，樣本內(nèi)的生化反應(yīng)減弱,，可中期保持組織細(xì)胞內(nèi)大分子的穩(wěn)定性,，短期保持細(xì)胞活性和組織微觀結(jié)構(gòu)；

液氮保存可長期保持組織細(xì)胞內(nèi)大分子的穩(wěn)定性,、細(xì)胞活性和組織微觀結(jié)構(gòu),；液氮保存時，盛裝樣本的Ep管管口需用封口膜密封,，防止管口爆開造成交叉污染,。

Western Blot檢測服務(wù)的實驗流程