組織自發(fā)熒光淬滅劑應(yīng)該如何正確使用

描述：

許多組織會(huì)產(chǎn)生可透過(guò)各種波長(zhǎng)濾光片的內(nèi)源性自發(fā)熒光,，顯著干擾抗體標(biāo)記熒光觀察甚至導(dǎo)致免疫組化染色失敗。自發(fā)熒光淬滅試劑中的離子可通過(guò)碰撞方式捕獲自發(fā)熒光光源分子發(fā)出的電子,，阻止該電子從激發(fā)態(tài)回歸基態(tài)和能量釋放,，從而淬滅自發(fā)熒光,。采用優(yōu)化的孵育時(shí)間，可以最大限度地消除自發(fā)熒光而不明顯影響抗體標(biāo)記的熒光,。

適用：

各種組織,、細(xì)胞免疫熒光染色的自發(fā)熒光消除。特別適用于神經(jīng)組織自發(fā)熒光淬滅,。

儲(chǔ)存：

4 oC避光,。

以下步驟在免疫熒光組化染色完畢之后(而非在熒光染色完畢之前)執(zhí)行。對(duì)特定的組織和細(xì)胞類型,，必需優(yōu)化孵育時(shí)間以便最大限度淬滅自發(fā)熒光而不明顯影響抗體標(biāo)記的熒光(步驟2),。請(qǐng)仔細(xì)閱讀后面的說(shuō)明。

1. 不同物種不同類型組織的自發(fā)熒光具有不同的特征,，使用組織自發(fā)熒光淬滅劑的效果可能會(huì)有差別,。另外，任何針對(duì)自發(fā)熒光的淬滅,，將會(huì)在一定程度上降低抗體熒光強(qiáng)度,。所幸的是該試劑對(duì)自發(fā)熒光的淬滅程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出抗體熒光強(qiáng)度的降低，因而能在二者之間獲得較好的平衡,。由于不很清楚的原因,，本試劑對(duì)于消除腦脊髓神經(jīng)組織的自發(fā)熒光具有更好的效果。

2. 為獲得最佳效果,，必需優(yōu)化孵育時(shí)間以便最大限度淬滅某一特定組織的自發(fā)熒光而不明顯影響抗體標(biāo)記的熒光(步驟2),。重要的標(biāo)本應(yīng)在確定最佳孵育時(shí)間之后使用本試劑。進(jìn)行優(yōu)化時(shí),，可取數(shù)張組織切片或位于培養(yǎng)皿中的細(xì)胞,，在免疫熒光組化染色完畢之后加入組織自發(fā)熒光淬滅劑，孵育5、10,、30,、60、90分鐘等不同時(shí)間,，沖洗后觀察熒光,。如果組織自發(fā)熒光仍然很強(qiáng)，可延長(zhǎng)孵育時(shí)間,；如果孵育時(shí)間小于10分鐘而熒光消退十分明顯,，可將孵育時(shí)間減少為1-5分鐘，或者取少量的組織自發(fā)熒光淬滅劑加等份的雙蒸水稀釋,，然后孵育10-90分鐘進(jìn)行優(yōu)化,。

3. 組織自發(fā)熒光淬滅劑必須在完成免疫熒光組化染色后使用，否則將嚴(yán)重降低抗體熒光,。

組織自發(fā)熒光淬滅劑應(yīng)該如何正確使用