本產(chǎn)品是一種用于分離人外周血淋巴細(xì)胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液,。主要成分是Ficoll400與泛影酸葡甲胺,。適用于從血液分離所需細(xì)胞，在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用,。其分離原理是根據(jù)血細(xì)胞的密度差異（紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度為1.090 g/mL左右,；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為1.075~1.090 g/mL；血小板為1.030~1.035 g/mL）,，通過離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,，從而將淋巴細(xì)胞從人外周血或臍帶血中分離出來。

產(chǎn)品指標(biāo)：

密度 1.077±0.001g/mL

滲透壓 290~350 mOsm/kg H₂O

無菌 0.1μm 濾膜過濾

操作步驟：

• 取新鮮抗凝全血（EDTA,、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血,。

• 在離心管中加入適量分離液（當(dāng)稀釋后血液體積小于3mL時,，加入3mL分離液；大于等于3mL,，加入等體積分離液,。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果）,，將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液,，然后將血液小心的平鋪于分離液上,，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町悾瑢⑿纬擅黠@的分層界面。如果樣品較多加樣時間較長,，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?，F(xiàn)象。）

• 室溫,，水平轉(zhuǎn)子500~1000g,，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時間越長,，最佳的分離條件需摸索,，離心轉(zhuǎn)速最大不超過1200g）。

• 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：最上層是稀釋的血漿層,，中間是透明的分離液層,，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細(xì)胞層，離心管底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞,。

• 小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心管中,，10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層細(xì)胞。250g,，離心10min,。

• 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞,，250g,，離心10min。

• 重復(fù)步驟6,。

• 棄上清,，細(xì)胞重懸備用。

分離純度：

使用人淋巴細(xì)胞分離液分離淋巴細(xì)胞的分離純度大于90%,。

注意事項(xiàng)：

• 開封前顛倒混勻,，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時間,，請在無菌條件下啟封,，避免微生物污染。

• 分離液使用時應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃）,，如室內(nèi)溫度較低,，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心,，可能會導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重,。

• 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），為保持淋巴細(xì)胞的活性,，應(yīng)避免冷凍和冷藏,。

• 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca,、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液,，其成分會導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度,。

• 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用,，可能會導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果,。

• 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間,，摸索最佳的分離條件,。

• 吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加；吸取過多的血漿層可能會導(dǎo)致淋巴細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染,。

• 如果要進(jìn)一步對分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),，那在收集血液和分離過程中，注意無菌操作,，避免微生物污染,。

• 不同動物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重,、動物種屬及被分離細(xì)胞的名稱,。

人外周血淋巴細(xì)胞分離液如何正確使用

人外周血淋巴細(xì)胞分離液如何正確使用

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