巴比B 妥電泳緩沖液配置簡單介紹 

0.05moI/L pH8.6 BBT緩沖液

BBT 1.84g

加蒸餾水 200ml 加熱溶解 BBT納 10.3g

疊氮納 0.2g

加蒸餾水溶解 , 并補(bǔ)加到 1000ml ,。

B比 妥緩沖液(pH8.6)：　取BBT5.52g與BBT鈉30.9g,加水使溶解成2000ml，即得,。

BBT－氯化鈉緩沖液(pH7.8)：　取BBT鈉5.05g,加氯化鈉3.7g及水適量使溶解,，另取明膠0.5g加水適量，加熱溶解后并入上述溶液中,。然后用0.2mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.8,，再用水稀釋至500ml,，即得。

 BBT電泳緩沖液（pH8.6）如何正確使用

醋酸纖維素薄膜電泳實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)：

1.首先,裁剪適量尺寸濾紙條來搭建濾紙橋,再將緩沖液倒入電泳槽,在醋酸纖維素薄膜無光澤面做好點(diǎn)樣標(biāo)記,。
2.然后,將該面在下浸入緩沖液約二十分鐘,在浸透*以后,取出吸取多余緩沖液的備用,。
3.然后,用加樣器取適量蛋白樣品均勻加于點(diǎn)樣線處,最終形成一定寬度、粗細(xì)均勻的直線,。
4.然后,將點(diǎn)樣端位于負(fù)極,無光澤面朝下,平整放于濾紙橋上,平衡完畢后,調(diào)節(jié)電壓并開始電泳,。

其他注意事項(xiàng)：

1、醋酸纖維素薄膜的預(yù)處理
　　市售醋酸纖維素薄膜均為干膜片,，薄膜的浸潤與選膜是電泳成敗的重要關(guān)鍵之一,。將干膜片漂浮于電極緩沖液表面,，其目的是選擇膜片厚薄及均勻度,，如漂浮15s—30s時，膜片吸水不均勻,，則有白斑點(diǎn)或條紋,，這提示膜片厚薄不勻，應(yīng)舍去不用,，以免造成電泳后區(qū)帶扭曲,，界線不清，背景脫色困難,，結(jié)果難以重復(fù),。由于醋酸纖維薄膜親水性比紙小，浸泡30min以上是保證膜片上有一定量的緩沖液,，并使其恢復(fù)到原來多孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),。最好是讓漂浮于緩沖液的薄膜吸滿緩沖液后自然下沉，這樣可將膜片上聚集的小氣泡趕著走,。點(diǎn)樣時,，應(yīng)將膜片表面多余的緩沖液用濾紙吸去,，以免緩沖液太多引起樣品擴(kuò)散。但也不能吸得太干,，太干則樣品不易進(jìn)入薄膜的網(wǎng)孔內(nèi),，而造成電泳起始點(diǎn)參差不齊，影響分離效果,。吸水量以不干不濕為宜,。為防止指紋感染，取膜時,，應(yīng)戴指套或用鑷子,。
　　
2、緩沖液的選擇 　　
醋酸纖維素薄膜電泳常選用 BBT電泳緩沖液（pH8.6）,，其濃度為0.05mol/L—0.09mol/L,。選擇何種濃度與樣品及薄膜的薄厚有關(guān)。選擇時,，先初步定下某一濃度,，如電泳槽兩極之間的膜長度為8 cm—10cm，則需電壓25V/cm膜長,，電流強(qiáng)度為0.4mA/cm—0.5mA/cm膜寬,。當(dāng)電泳達(dá)不到或超過這個值時，則應(yīng)增加緩沖液濃度或進(jìn)行稀釋,。緩沖液濃度過低,，則區(qū)帶泳動速度快，并由于擴(kuò)散變寬,；緩沖液濃度過高,，則區(qū)帶泳動速度慢，區(qū)帶分布過于集中不易分辨,。 　
　
3,、加樣量
　　加樣品的多少與電泳條件、樣品的性質(zhì),、染色方法與檢測手段靈敏度密切相關(guān),。作為一般原則，檢測方法越靈敏,，加樣量則越少,，對分離更有利。如加樣量過大,，則電泳后區(qū)帶分離不清楚,，甚至互相干擾，染色也較費(fèi)時。如電泳后用洗脫法定量時,，每厘米加樣線上需加樣品0.1μl—0.5μl約相當(dāng)于5μg—1000μg蛋白,。血清蛋白常規(guī)電泳分離時，每厘米加樣線加樣量不超過1μl,，相當(dāng)于60μg—80μg的蛋白質(zhì),。但糖蛋白和脂蛋白電泳時，加樣量則應(yīng)多些,。對每種樣品加樣量均應(yīng)先作預(yù)實(shí)驗(yàn)加以選擇,。
　　點(diǎn)樣好壞是獲得理想圖譜的重要環(huán)節(jié)之一，以印章法加樣時,，動作應(yīng)輕,、穩(wěn)，用力不能太重,，以免將薄膜弄壞或印出凹陷而影響電泳區(qū)帶分離效果,。 　　
4、電量的選擇
　　電泳過程應(yīng)選擇合適的電流強(qiáng)度,，一般電流強(qiáng)度為0.4mA/cm—0.5mA/cm寬膜為宜,。電流強(qiáng)度高，尤其在溫度較高的環(huán)境中,，可引起蛋白質(zhì)變性或由于熱效應(yīng)引起緩沖液中水分蒸發(fā),，使緩沖液濃度增加，造成膜片干涸,。電流過低,，則樣品泳動速度慢且易擴(kuò)散。
5,、染色液的選擇
　　對醋酸纖維素薄膜電泳后染色應(yīng)根據(jù)樣品的特點(diǎn)加以選擇,。其原則是染料對被分離樣品有較強(qiáng)的著色力，背景易脫色,；應(yīng)盡量采用水溶性染料,，不宜選擇醇溶性染料,，以免引起醋酸纖維素膜溶解,。
　　應(yīng)控制染色時間。時間長,，薄膜底色深不易脫去,；時間短，著色淺不宜區(qū)分,，或造成條帶染色不均,，必要時可進(jìn)行復(fù)染。 　
　
6,、透明及保存
　　透明液應(yīng)臨用前配制,，以免冰乙酸及乙醇揮發(fā)影響透明效果,。這些試劑最好選用分析純。透明前,，薄膜應(yīng)*干燥,。透明時間應(yīng)掌握好，如在透明乙液中浸泡時間太長則薄膜溶解,，太短則透明度不佳,。
　　透明后的薄膜*干燥后才浸入石蠟中，使薄膜軟化,。如有水,，則液體石蠟不易浸入，薄膜不易平展,。宜,。

巴比B 妥電泳緩沖液配置簡單介紹