HEPES溶液(0.5mol/L) 應(yīng)該如何使用

上海信帆生物供應(yīng)的 HEPES溶液，規(guī)格有100ml和500ml,，濃度多樣,，PH也有很多,，滿足不同客戶的不同實(shí)驗(yàn)。

詳情如下：

在細(xì)胞培養(yǎng) 過程中,，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液,。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢,，在開放式的培養(yǎng)條件中,，若加入HEPES，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高,，從而將PH維持在7.0左右,。

HEPES分子 量為238.31，化學(xué)名：,，分子式: C8H18N2O4S,。

HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2,，用在生化診斷試劑盒,、DNA/RNA提取 試劑盒及PCR診斷試劑盒里。對(duì)細(xì)胞無毒性作用,。它是一種氫離子緩沖劑,，能較長時(shí)間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L,。

關(guān)于HEPES 緩沖溶液的配制,，不同的文獻(xiàn)資料有不同的說法。根據(jù)用途,，一種是單純的HEPES+NaOH,，另一種是HEPES+鹽。各種配制方法總結(jié)如下：

一,、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中,，加0.5~1M 的NaOH水溶液調(diào)節(jié)至少所需pH(HEPES的有效pH 范圍是6.8~8.2)，然后用蒸餾水定容至500ml,，于4攝氏度保存,。

二、加少量鹽的HEPES Buffer配方(500ml)

HEPES 6.5g,、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g,、用0.5M NaOH 水溶液調(diào)節(jié)pH值,，最后定容。

三,、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制

將1.6g NaCl,、0.074g KCl,、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸餾水,，用0.5M NaOH調(diào)節(jié)至所需pH值,，再用蒸餾水定容至100ml即可。

HEPES使用方法有兩種：

(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中,，再過濾除菌,。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 調(diào)pH至7.2,，濾過除菌后使用,。此時(shí)HEPES的使用濃度為10 mmol/L。

(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L),，使用前取 99ml培養(yǎng)液加入 lml貯存液,，最終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中,，用lN NaOH調(diào)pH至7.5一8.0,，然后用水定容至100ml，過濾除菌,，分裝小瓶(2ml/瓶),，4℃或-20℃保存。

需要注意的是,，HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L,，對(duì)細(xì)胞無毒性作用。一般情況下,，濃度為20mmol/L的HEPES即可達(dá)到緩沖能力?，F(xiàn)在市售HEPES為約10g包裝的小瓶，大家根據(jù)實(shí)際情況正確靈活配制就OK了

HEPES溶液(0.5mol/L) 應(yīng)該如何使用