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人端粒酶(TE)檢測原理,!
端粒酶(Telomerase),在細胞中負責端粒的延長的一種酶,,是基本的核蛋白逆轉(zhuǎn)錄酶,,可將端粒DNA加至真核細胞染色體末端,把DNA復制損失的端粒填補起來,,使端粒修復延長,,可以讓端粒不會因細胞分裂而有所損耗,使得細胞分裂的次數(shù)增加,。
產(chǎn)品名稱:人端粒酶(TE)ELISA檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:96T
儲存條件:2-8℃,,避光防潮保存
有效期:6個月
檢測原理:
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人端粒酶(TE)捕獲抗體的包被微孔中,,依次加入標本,、標準品,、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人端粒酶(TE)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度,。
實驗步驟(僅供參考)
1. 從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,;
3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL,;
4. 隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5. 棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板),。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,,37℃避光孵育15min,。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),,在450nm波長處測定各孔的OD值,。
試劑盒性能:
1.準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900,。
2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 ng/ml,。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。
4. 重復性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,、板間變異系數(shù)小于15%,。
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