上海信帆生物組織開展了：血液樣本的收集與保存的培訓(xùn)活動

上海信帆生物針對血液樣本的收集和保存開展了培訓(xùn)活動,，希望此次的分享對大家有所幫助,！

全血根據(jù)收集的條件,，分成不抗凝和抗凝兩種,。同時,，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清,；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

標(biāo)本的存放溫度及時間,，血清,、血漿及細(xì)胞分離的方法步驟也是分析前影響檢驗結(jié)果的重要因素。抽血后,，血細(xì)胞因代謝需要,，要消耗掉部分營養(yǎng)成分，故對這些成分進(jìn)行測定時,，需及時地離心以分離掉細(xì)胞成分,。

采血前個體的準(zhǔn)備情況，如空腹時間的長短,、采樣時間的確定及采血時患者的姿勢,；止血帶應(yīng)用時間，輸液情況,，體育運動,，抗凝劑及穩(wěn)定劑的選用；標(biāo)本的處理等均可影響到某些檢驗指標(biāo)的水平,。故標(biāo)本采集過程應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化,，以大限度地減少分析前誤差,。

一、不抗凝收集血清：

1,、無添加劑的干燥空管收集:

血管內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的藥劑(硅油),。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固，等血清自然析出后,，離心使用,。主要用于血清生化(肝功、腎功,、心肌酶,、淀粉酶等)、電解質(zhì)(血清鉀,、鈉,、氯、鈣,、磷等),、甲狀腺功能、藥物檢測,、艾滋病檢測、腫瘤標(biāo)志物,、血清免疫學(xué)檢測,。
    亦可直接用干燥EP管收集全血，充分靜置使得紅細(xì)胞充分自然凝固后,，離心分離出血清待用或保存,。

2、用促凝管收集:

采血管內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的硅油,，同時添加了促凝劑,。促凝劑能激活纖維蛋白酶，使可溶性纖維蛋白變成不可溶性的纖維蛋白聚體,，進(jìn)而形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊,，如果想快點出結(jié)果時，可采用促凝管,。一般靜置半小時到1小時,，直接離心分離出血清待用或保存,常用于急診生化。

3,、含有分離膠及促凝劑的采血管收集：

管壁經(jīng)過硅化處理,，并涂有促凝劑可加速血液的凝固，縮短檢驗時間,。管內(nèi)加有分離膠,，分離膠與PET管具有很好的親和性,，確實起到隔離作用，一般即使在普通離心機(jī)上,，分離膠能將血液中的液體成分(血清)和固體成分(血細(xì)胞)*分開并積聚在試管中形成屏障,。離心后血清中不產(chǎn)生油滴，主要用于血清生化(肝功,、腎功,、心肌酶、淀粉酶等),、電解質(zhì)(血清鉀,、鈉、氯,、鈣,、磷等)、甲狀腺功能,、藥物檢測,、艾滋病檢測、腫瘤標(biāo)志物,、血清免疫學(xué),。

    用促凝管的優(yōu)點：

①、加速紅細(xì)胞的凝固,，無需長時間的靜置,；

②、帶有分離膠,，有效的將血清分離出來,，更好的避免溶血；

    收集血清的缺點：

①,、需要紅細(xì)胞的充分凝固,，所需靜置時間較長；

②,、分離出的血清相對較少,，1ml全血不抗凝約只能分離出0.2-0.3ml血清。

二,、抗凝收集血漿：

收集抗凝全血,，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接離心分離血漿待用或保存,。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉,。

1,、肝素抗凝：

常用的抗凝劑，一般情況下對相關(guān)指標(biāo)都不會有干擾,，同時抗凝比例較大（抗凝劑：

全血=1:30）,，對血液基本沒有稀釋影響。

肝素是一種含有硫酸基團(tuán)的粘多糖,，帶有強(qiáng)大的負(fù)電荷,，具有加強(qiáng)抗凝血酶III滅活絲

氨酸蛋白酶的作用，從而阻止凝血酶的形成,，并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用,。肝素管一般用于生化及血流變的檢測，是電解質(zhì)檢測的佳選擇,，檢驗血標(biāo)本中的鈉離子時,，不能使用肝素鈉，以免影響檢測結(jié)果,。也不能用于白細(xì)胞計數(shù)和分類,，因肝素會引起白細(xì)胞聚集。

盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質(zhì)濃度無顯著差別,，但肝素鋰還是被認(rèn)為是好的,。這主要是人們認(rèn)為肝素鈉可使鈉的測定值偏高，肝素銨可使血氨測定值偏高（尿素酶法測定）,。

肝素可抑制分子生物學(xué)中常用的一些工具酶,，如限制性內(nèi)切酶、Taq酶等,，可影響PCR

的實驗結(jié)果?？刹捎靡恍┓椒ㄏ嗡氐囊种菩?yīng),，如利用肝素酶，或在分離白細(xì)胞后用緩沖液洗滌白細(xì)胞兩次以上等,。然而,，許多實驗工作者仍不愿意在進(jìn)行分子生物學(xué)實驗時采用肝素作抗凝劑。

2,、EDTA抗凝：

乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸,，可以有效地鰲合血液中的鈣離子，鰲合鈣會將鈣從

反應(yīng)點移走將阻止和終止內(nèi)源性或外源性凝血過程,，從而防止血液凝固,，與其他抗凝劑比較而言，其對血球的凝集及血細(xì)胞的形態(tài)影響較小，故通常使用EDTA鹽(2K,、3K,、2Na)作為抗凝劑。用于一般血液學(xué)檢查,，不能用于血凝,、微量元素及PCR檢查。
    由于EDTA會螯合重金屬離子,，用該抗凝劑的話,，部分帶有金屬離子的大分子酶都會有大量損失，具體看客戶測定的指標(biāo)來選擇,，做血常規(guī)的話必須用EDTA抗凝,。

   3、枸櫞酸鹽抗凝:

檸檬酸鈉通過作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用,，國家研究實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)推薦為3.2％或3.8％,，抗凝劑與血比例為1：9，主要用于纖溶系統(tǒng)(凝血酶原時間,、凝血酶時間,、活化部分凝血酶時間、纖維蛋白原),。采血時應(yīng)注意采足血量,，以保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，采血后應(yīng)立即輕輕顛倒混勻5-8次,。由于抗凝比例較?。鼓齽喝?1:9），對血液有一定的稀釋,，一般不建議,。

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②,、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝,，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

       ③,、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4-0.5ml血漿）;

       ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

       血清,、血漿收集好后,，暫時不測定,，可立即低溫凍存，溫度越低越好,，中間如*凍融,，-20℃以下可保存一個月,-70℃以下可保存三個月。

三,、收集血清,、血漿所用離心轉(zhuǎn)速：

   分離血清或血漿，根據(jù)種屬不同,，離心轉(zhuǎn)速也有差異,推薦離心轉(zhuǎn)速為:

       ①,、小鼠：一般1000-1500轉(zhuǎn)/分，離心8-10分鐘,；

②,、大鼠、兔子：一般2000-2500轉(zhuǎn)/分,，離心8-10分鐘,；

③、人：一般2500-3000轉(zhuǎn)/分,，離心8-10分鐘,。

四、高脂及溶血因素的影響:

溶血的影響:

溶血對某些檢驗指標(biāo)的的影響不僅取決于所采用的方法,，也取決于所用的分析儀器,。采用雙

波長測定法可在一定程度上消除Hb的顏色干擾，然而Hb的干擾并不能*消除,，尤其是當(dāng)Hb可以與采用的試劑發(fā)生作用時,。總的來說,，輕微的溶血,，對大多數(shù)研究化學(xué)指標(biāo)的測定方法無明顯干擾。嚴(yán)重的溶血,，可能有兩方面的影響：（1）測定成分在紅細(xì)胞內(nèi)的濃度高于血漿時,，導(dǎo)致測定結(jié)果偏高；（2）測定成分在RBC內(nèi)濃度低于血漿時,，產(chǎn)生輕微的稀釋效應(yīng)。

用肉眼觀察標(biāo)本是否溶血只能是粗略的判斷,。只有當(dāng)血清中血紅蛋白濃度超過20mg/dl時,，

肉眼才能見到溶血情況。有人報導(dǎo)0.1％的紅細(xì)胞發(fā)生溶血后,，其血清外觀與非溶血標(biāo)本一致,；

1％紅細(xì)胞發(fā)生溶血后,，血清清亮，呈櫻紅色,，這樣的標(biāo)本就代表了中度溶血,。

有人建議用血清Hb濃度來對溶血程度進(jìn)行判斷。非溶血標(biāo)本血清游離Hb為4.8±3.2mg/dl,中度溶血血清Hb為43.5±13.9mg/dl,。即使輕微的溶血也可能導(dǎo)致相應(yīng)指標(biāo)的測定結(jié)果偏高(如LDH,、ACP、K等),，這樣的標(biāo)本應(yīng)盡量避免使用,。

高脂的影響:

高脂血癥所產(chǎn)生的混濁對某些指標(biāo)測定的影響，同樣取決于所采用的測定方法,。一般而言,，脂血通過樣品不均一性、水置換,、親脂成分的吸收而影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,。肉眼可見的脂血標(biāo)本可影響總蛋白的測定、電泳及色譜分析等,。

五,、全血或紅細(xì)胞的收集及保存

        測定全血或者是紅細(xì)胞中相關(guān)指標(biāo)的話，首先需要收集抗凝全血,。

   全血：收集抗凝全血,，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接定量吸取全血,，用冷蒸餾水制備溶血液后

用于不同指標(biāo)的檢測,；也可定量吸取全血，轉(zhuǎn)入EP管,，低溫凍存（溫度越低越好）,，測定

之前解凍并按比例加入冷蒸餾水制成溶血液用于檢測。

   紅細(xì)胞：收集抗凝全血,，輕輕顛倒充分抗凝后,，直接離心吸走血漿，留下層紅細(xì)胞,，加入3倍

體積的生理鹽水,，輕輕顛倒混勻，500～1000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,，棄上清留沉淀紅細(xì)胞,

重復(fù)2～3次,至上清液無色為止（洗滌紅細(xì)胞）,。

        ①、直接定量吸取紅細(xì)胞,，按比例加入冷蒸餾水制成溶血液待測,；

②,、定量吸取紅細(xì)胞，轉(zhuǎn)入EP管,，立即低溫凍存（溫度越低越好）,，測定之前解凍，并按

比例加入冷蒸餾水制成溶血液用于檢測(解凍后部分紅細(xì)胞會破裂,因此樣本冷凍保存之

前必須進(jìn)行定量),。

    溶血液的制備：定量吸取紅細(xì)胞或者全血,，按比例加入冷蒸餾水，充分漩渦混勻制備溶血液

(對光觀察,，溶液澄清透亮,可顯微鏡觀察紅細(xì)胞是否破裂,如未破可延長混勻時間),，稀釋

成不同濃度用于不同指標(biāo)的檢測。

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