全血線粒體提取試劑盒,，現(xiàn)貨供應(yīng)

上海信帆生物供應(yīng)全血線粒體提取試劑盒，可以提取血液中線粒體,，產(chǎn)品現(xiàn)貨供應(yīng),，歡迎大家隨時(shí)咨詢！

一,，試劑盒組份

組份                          XF9701-A (50T)    XF9701-A (100T)

紅細(xì)胞裂解液（10X）              100ml             100ml*2

白細(xì)胞裂解液                     50 mL              100 mL

線粒體清洗液                      25 mL             50 mL

線粒體保存液                     5 mL                 10 mL

二,，保存條件

本試劑盒三個(gè)月內(nèi)使用可 4℃儲(chǔ)存，長(zhǎng)期可置-20℃,。

三,，說明

本試劑盒可用于從血液中分離完整而純化的線粒體。

其制備物,，可以被用于細(xì)胞凋亡,、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究,。但不適用于進(jìn)一步 DNA 提取,。

四，操作步驟

1. 血液處理：

血液要求：非肝素鈉抗凝血,，使用新鮮血液,。對(duì)于陳舊血液，由于凍凝過程中冰晶已經(jīng)對(duì)細(xì)胞核膜和

線粒體膜產(chǎn)生損傷,，所以線粒體得率會(huì)大大減少,，并且完整性也會(huì)降低。

a. 對(duì)于無(wú)核紅細(xì)胞全血（如哺乳動(dòng)物處周血）,，取血約 5ml（適當(dāng)分成幾管）,，加入 3 倍體積的紅細(xì)胞裂

解液（稀釋后的工作液,下同）,，混勻，800 × g

5 min 離心收集白細(xì)胞,。加入 1-2ml 紅細(xì)胞裂解液（稀

釋后的工作液）,，吹打重懸白細(xì)胞，合并于一管中,，800 × g 5~10 min 離心收集白細(xì)胞,。此時(shí)如果白細(xì)

胞有可見紅色，可再次用少量(0.5ml)紅細(xì)胞裂解液洗細(xì)一次,。

b. 對(duì)于有核紅細(xì)胞全血（如禽類全血）,，取約 200-300ul 全血，800 × g 5~10 min 離心收集全細(xì)胞,，用

生理鹽水或者 PBS 清洗兩次，留沉淀去上清,。清洗時(shí)請(qǐng)用去尖吸頭吹打,。

2. 在收集到的細(xì)胞中,，加入 1.0 mL 冰預(yù)冷的白細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞,，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿

器內(nèi)，0℃冰浴研磨 20~40 次,；

3. 勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管,，4℃，1000× g 離心 5 min,；

4. 取上清,，加入一新的離心管中,，4℃,，1000× g 再次離心 5 min（一共兩次離心，完整去核）,。

5．取上清,，加入一新的離心管中，4℃,， 12,000 × g 離心 10 min,。離心后的上清含胞漿成分，可從中

提取胞漿蛋白,。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管,，線粒體沉淀在管底；

6. 在線粒體沉淀中加入 0.5 mL 線粒體清洗液重懸線粒體沉淀,，4℃，1000× g 離心 5 min(再次去核）；

7．取上清,，加入一新的離心管中，4℃,， 12,000 × g 離心 10 min,。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管

底,；

8. 用 50 -100μL 線粒體保存液或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀,，立即使用或-70℃保存,。

四 注意事項(xiàng)：

為保證獲得完整及盡可能多的線粒體,，勻漿條件要示：一是全程低溫操作,。第二是快速,。第三,，如有條

件可將勻漿后的碎片在顯微鏡下觀察,。

全血線粒體提取試劑盒,，現(xiàn)貨供應(yīng)