紅細(xì)胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×) 操作步驟：

注意：絕大多數(shù)情況下,，應(yīng)使用無菌去離子水稀釋RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用,，流式細(xì)胞術(shù)除外。

A,、組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作

1,、制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液,，離心棄上清,。

2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer,，輕柔吹打混勻,，裂解1～2min。 3,、離心,，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作,。

4,、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次,。

5,、洗滌：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,，輕柔混勻重懸沉淀。4℃離心,，棄上清,，該離心步驟亦可在室溫下操作,。

B、組織細(xì)胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1,、制備細(xì)胞懸液：新鮮組織經(jīng)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,，制備細(xì)胞懸液，離心棄上清,。

2,、裂解：加入細(xì)胞5倍細(xì)胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻裂解,。

3,、加入PBS、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,，輕柔混勻。

4,、離心5min,，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作,。

5,、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2～4各一次,。

6,、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù),、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn),。

C、血液樣本的常規(guī)操作

1,、取新鮮抗凝血,，離心，棄上清,。

2,、 裂解：加入1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻,，裂解1～5min,。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作,。

3,、離心：棄紅色上清,。本步驟亦可在室溫下操作,。

4,、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次,。

5,、洗滌： 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,，輕柔混勻重懸沉淀；4℃離心,，棄上清,，該離心步驟亦可在室溫下操作。

6,、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn),。

D,、血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1、新鮮抗凝血中加入10倍體積的1×RBC Lysis Buffer,，輕輕吹打混勻,，裂解4～15min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳,，亦可在室溫下操作,。

2、加入 PBS,、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻,。

3,、離心，棄紅色上清,。4℃離心效果更佳,。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次,。

5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,，進(jìn)行計(jì)數(shù),、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

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