DEAE-纖維素DE-32,，Cellulose DE-32

上海信帆生物供應(yīng)DEAE-纖維素DE-32,，Cellulose DE-32，現(xiàn)貨充足,，歡迎咨詢,！

DEAE-纖維素,，它采用平均粒徑為50µm的顆粒型親水高分子聚合物，表面又用大分子糖鏈接枝,，使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性,，保持更高載量，同時(shí)又具有更好的分辨率,。由于比表面積大,，平衡和洗脫的時(shí)間也更短。它經(jīng)過接枝即使是純化病毒,，質(zhì)粒等超大分子的物質(zhì),，載量基本保持不變。

DEAE—離子交換劑純化血清IgG使用步驟及注意事項(xiàng)

 DEAE-纖維素（Diethylaminoethyl-cellulose,，DEAE）是在纖維素上引入二乙基氨基乙基,，屬于弱堿型陰離子交換劑。吸附蛋白質(zhì)的適pH范圍為7～9,，pH超過9.5,，DEAE基團(tuán)則不解離帶電荷。每克DEAE含0.96～1.24mmol/L可解離基團(tuán),，與蛋白質(zhì)的交換量可75-122mg/100mgDEAE,。

    應(yīng)用離子交換劑來純化物質(zhì)，可以是把要純化的物質(zhì)成分交換吸附于離子交換劑上,，然后再分別洗脫下來獲得純品,，或者把不需要的成分吸附于離子交換劑上，需要的成分直接流出,，得到純品,。本實(shí)驗(yàn)采用DEAE-纖維素層析柱純化血清IgG，利用pH6.7的緩沖液溶解樣品IgG,，此時(shí)IgG粗物中除IgG外,，其他雜蛋白均帶上不同數(shù)量的負(fù)電荷，可以和DEAE上的陰離子發(fā)生交換吸附于柱上,。IgG因不解離帶電,，而不發(fā)生交換吸附，利用此特點(diǎn),，讓溶解后的樣品流過DEAE纖維素柱,，即可直接收集到較純的IgG。

  （一）試劑及器材

    1.   0.0175mol/L,， pH6.7,，磷酸鹽緩沖溶液

    2.   奈氏試劑。

    3.   20%（W/V）磺基水楊酸溶液,。

    4.   1cm×50cm

    5.   黑,、白比色磁盤,。

    （二）操作步驟

    1．活化

    根據(jù)所需層析柱的柱床體積計(jì)算所需DEAE的用量，稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜,，其間換幾次水,，每次除去細(xì)小顆粒。抽干,，改用0.5ml/L NaOH溶液浸泡1h以上,，抽干（可用布氏漏斗），用無離子水漂洗,，使pH至8左右（用pH試紙檢查）,。再改用0.5ml/L HCl溶液浸泡1h以上，去酸溶液,，用無離子水洗至pH6左右,。然后用0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液,，浸泡平衡后使用。

    2．裝柱

    用0.0175mol/L,，pH6.7,，磷酸鹽緩沖溶液浸泡已處理好的DEAE-纖維素，并更換1～2次,。然后攪拌均勻,，灌入層析柱中，直至纖維素柱床高約17cm左右為止,。柱床形成后,，在洗脫瓶裝入0.0175mol/L pH6.7磷酸鹽緩沖溶液，接在層析柱上口,，打開柱下端出口,，使磷酸鹽緩沖溶液流過纖維素，直至流出液的pH值與磷酸鹽緩沖溶液的pH值*相同（用pH試紙不斷檢查）為止,。

    3．上樣 

    上述平衡過程完畢后,，關(guān)閉柱下口。用滴管吸去纖維素柱面上的深液（但不能低于柱下口）,，控制流速使樣品慢慢進(jìn)入纖維素內(nèi),。待全部樣品進(jìn)入柱后，在柱床面上加一層0.0175mol/L  pH6.7 磷酸鹽緩沖溶液,。

    4．洗脫

    連接洗脫瓶,，打開柱下口開始洗脫?？刂屏魉贋?.5ml/min,， 用試管收集洗脫液,，每管10滴。從每滴中取1滴收集液放入在黑色比色盤孔中,，加入1滴20%磺基水楊酸檢查是否產(chǎn)生白色沉淀,。在此條件下在收集液中首先出現(xiàn)的蛋白質(zhì)即為純化的IgG。因此,，從洗脫開始就應(yīng)收集洗脫液,，直至收集液中無蛋白質(zhì)出現(xiàn)為止（加磺酰水楊酸不呈白色沉淀），合并含有蛋白質(zhì)的各管收集液中無蛋白質(zhì)即為純化的IgG溶液,。

    5．再生 

    用過的離子交換劑可以反復(fù)使用,，使其恢復(fù)原狀的方法俗稱“再生”。 由于DEAE-纖維素使用后因帶有大量雜蛋白,，所以再生時(shí),，先用0.5ml/L NaOH浸洗，用無離子洗至pH8左右,，然后用0.0175mol/L,，pH6.7磷酸鹽緩沖溶液浸泡即可轉(zhuǎn)型再使用。

    6．鑒定 

    純化后獲得的蛋白質(zhì)樣品均應(yīng)進(jìn)行鑒定后方能證明產(chǎn)品的合格性,。

DEAE-纖維素DE-32,，Cellulose DE-32