Overview
藥品通常是根據(jù)嚴(yán)格的GMP指南生產(chǎn)的,，作為批量放行前的保險(xiǎn)措施，所有藥品都要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的無(wú)菌檢測(cè),，以確定是否存活微生物,。Sterisart®是一種基于膜過(guò)濾法的無(wú)菌檢測(cè)封閉系統(tǒng)。該封閉系統(tǒng)不需要對(duì)膜過(guò)濾器進(jìn)行物理操作,，從而可降低二次污染和假陽(yáng)性的風(fēng)險(xiǎn),。
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本篇《Sterisart®的隔膜可確保從封閉系統(tǒng)無(wú)菌檢測(cè)裝置中進(jìn)行可靠取樣》應(yīng)用說(shuō)明評(píng)估了配有隔膜的Sterisart® 封閉系統(tǒng)無(wú)菌檢測(cè)裝置用于樣品反復(fù)無(wú)菌提取的性能。結(jié)果表明,，即使在超過(guò)100 次重復(fù)的隔膜取樣操作（遠(yuǎn)遠(yuǎn)*可預(yù)見(jiàn)的取樣要求）之后,，隔膜仍然完好無(wú)損，并且這些容器中包含的生長(zhǎng)培養(yǎng)基仍然無(wú)菌,。
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材料和方法
耗材
胰蛋白大豆肉湯（TSB）（Gila/BD）,、硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM）（Gila/BD）、TSB（Merck）,、FTM（Merck）,、胰蛋白大豆瓊脂（TSA）（Merck）、玻璃反應(yīng)管 - 30 mL（Borosil）,、針頭–0.90×70 mm,、2OG×2?（Sterican–B.Braun）、注射器–F Luer（Omnifix–B.Braun）,。
設(shè)備
Sterisart®,，培養(yǎng)箱，Combisart® 三聯(lián)過(guò)濾支架,，直排泵,。
Sterisart® NF無(wú)菌試驗(yàn)系統(tǒng)
16467--------GSD, 16475--------GSD, 16466--------GSD
膜過(guò)濾
在隔膜取樣試驗(yàn)中，對(duì)來(lái)自三種隔膜類(lèi)型的分別10個(gè)Sterisart® 料筒（總共 30 個(gè)）進(jìn)行了分析,。
10個(gè)料筒中有一個(gè)（來(lái)自每種Sterisart® 容器類(lèi)型）作為陰性對(duì)照,。
在無(wú)菌條件下，在生物安全柜中往Sterisart®培養(yǎng)料筒中灌裝生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。將兩個(gè)Sterisart®料筒放置在泵支架上,，并使Sterisart®管路系統(tǒng)穿過(guò)泵頭。使用封閉的翼形螺母塞密封每個(gè)Sterisart®料筒的出口,。兩個(gè)無(wú)菌通風(fēng)過(guò)濾器不加蓋,。打開(kāi)Y型分配器出口處的黃色管夾，并關(guān)閉相鄰的白色管夾,。將雙針金屬釘插入裝有FTM的瓶子中,，并開(kāi)啟Sterisart®泵,。將預(yù)定體積（75 ml）的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到第一個(gè)料筒中后，關(guān)閉泵,。打開(kāi)Y型分配器出口處的白色管夾,，并關(guān)閉相鄰的黃色管夾。將雙針金屬釘插入裝有TSB的瓶子中,，并開(kāi)啟Sterisart®泵,。將相似體積（75 ml）的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到第二個(gè)料筒中。使用培養(yǎng)料筒入口上方的兩個(gè)夾具密封管道,，從而切斷管路,。
將含有TSB的Sterisart®料筒在 22.5 °C下培養(yǎng) 24 天。其中TSB是用于檢測(cè)低發(fā)病率真菌和好氧細(xì)菌的推薦生培養(yǎng)基,。將含有FTM的Sterisart®料筒在 32.5 °C下培養(yǎng) 24 天,。其中FTM是用于培養(yǎng)需氧、微需氧和厭氧微生物的推薦生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。
隔膜取樣
無(wú)菌條件下,，在生物安全柜中從Sterisart®料筒中提取樣品。從Sterisart®培養(yǎng)料筒的頂部,、中部和底部提取三個(gè)樣品,，每個(gè)樣品 100 μl，每天提取兩次,，共持續(xù) 17 天（3×2×17=102 個(gè)樣品）,。將提取的樣品轉(zhuǎn)移到含有無(wú)菌液體培養(yǎng)基、FTM和TSB的玻璃反應(yīng)管中,。含有TSB的小瓶在 22.5 °C下培養(yǎng) 14 天，含有FTM的小瓶在 32.5 °C下培養(yǎng) 14 天,。通過(guò)對(duì)每個(gè)Sterisart®裝置和相應(yīng)的提取樣品進(jìn)行拍照,，以便記錄結(jié)果。
微生物計(jì)數(shù)
使用放置在無(wú)菌Combisart®過(guò)濾裝置中的黑色的網(wǎng)格膜過(guò)濾器,，并連接至直排泵,，以進(jìn)行最后的檢查。在Sterisart®料筒中培養(yǎng) 24 天后,，將 60 - 70 ml TSB填充到漏斗中,，并通過(guò)黑色薄膜過(guò)濾器過(guò)濾。使用無(wú)菌鑷子將過(guò)濾器轉(zhuǎn)移到TSA板上,，并將該板在 36 °C下培養(yǎng) 3 - 5 天,。然后檢查這些板是否有微生物污染。
結(jié)果與討論
在 102 次隔膜穿孔并反復(fù)提取樣本后,，確定所有Sterisart® 料筒（3 × 9 個(gè)含有FTM,，3 × 9 個(gè)含有TSB,；第 10 個(gè)料筒含有FTM和TSB作為各自的對(duì)照）均為無(wú)菌，且在 24 天后未檢測(cè)到微生物污染,。（圖1）
同樣,，所提取的樣品也是無(wú)菌的，沒(méi)有微生物生長(zhǎng),，這表明Sterisart®隔膜可以實(shí)現(xiàn)高效和高度可靠的無(wú)菌取樣,。（圖2）
圖1：重復(fù)提取樣品后無(wú)微生物污染。Sterisart® 16466 GSD 版本填充了TSB（A和B）或FTM（C和D）,，并分別在 22.5 °C和 32.5 °C下培養(yǎng) 24 天期間的代表性圖像,。陰性對(duì)照顯示在A和C中。
為了進(jìn)行樣品提取,，B和D中的料筒被穿孔 102 次,。
圖2：從Sterisart®16466 GSD 提取的樣品在玻璃瓶中培養(yǎng)后沒(méi)有微生物污染。將樣品接種到含有TSB（上層板）和FTM（下層板）的玻璃瓶中,，分別在22.5° C和32.5° C下生長(zhǎng) 14 天,。
當(dāng)隔膜被多次刺穿或使用了不合適的針型時(shí)，可能會(huì)發(fā)生“結(jié)晶"的情況,。在某些Sterisart®料筒中,，僅在 36 次穿孔后就觀察到微小顆粒。24 天后在黑色薄膜過(guò)濾器上收集這些顆粒,，并監(jiān)測(cè)其在TSA板上形成菌落的能力,。這些顆粒即使在培養(yǎng)五天后也沒(méi)有表現(xiàn)出任何生長(zhǎng)跡象，這表明這些顆粒在本質(zhì)上不具生物活性,。根據(jù)其形態(tài),，我們得出結(jié)論，這些惰性顆粒是在注射器針頭反復(fù)穿刺過(guò)程中從隔膜上剪下的橡膠碎片,。這些碎片不會(huì)影響無(wú)菌試驗(yàn)的效果,，并且?guī)缀醪粫?huì)落入在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。
結(jié)果表明,，Sterisart® 料筒即使在連續(xù)提取 102 個(gè)樣品后,，仍然是一個(gè)封閉且無(wú)菌的裝置。
結(jié)論
總而言之,，該研究證明了Sterisart®隔膜的強(qiáng)大性能,，即使在提取了 100 多個(gè)樣品后仍能保持完整的無(wú)菌環(huán)境。
在無(wú)菌檢測(cè)產(chǎn)品中,，由于防腐劑和抗菌劑的存在,，在很大程度上阻礙了依賴直接接種的快速檢測(cè)方法的采用。此類(lèi)產(chǎn)品的膜過(guò)濾及隨后的膜沖洗可減少無(wú)菌檢測(cè)期間出現(xiàn)假陰性的風(fēng)險(xiǎn)。通過(guò)膜過(guò)濾實(shí)現(xiàn)大體積分析,，并實(shí)現(xiàn)樣品提取,，從而為用戶提供了將封閉系統(tǒng)無(wú)菌檢測(cè)與快速無(wú)菌檢測(cè)方法相結(jié)合的能力。
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德國(guó)賽多利斯集團(tuán) | 下載次數(shù) |
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