M-AChRM2 ELISA

M-AChRM2 ELISA標(biāo)本必須為液體，不含沉淀,。包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類(lèi),。
◇      血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
◇      血漿：
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
◇      尿液,、胸腹水,、腦脊液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇      細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

細(xì)胞株

　　液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好,？還是冷凍好,？

　　要冷藏！,！因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí),，其溶液的pH值會(huì)發(fā)生改變，溶液往往變堿,，某些成分溶解也會(huì)受到影響對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利,。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 一年,。

　　細(xì)胞計(jì)數(shù)及存活測(cè)試
1,、原理：
(1)計(jì)算細(xì)胞數(shù)目可用血球計(jì)數(shù)盤(pán)或是Coultercounter粒子計(jì)數(shù)器自動(dòng)計(jì)數(shù)。
(2)血球計(jì)數(shù)盤(pán)一般有二個(gè)chambers，每個(gè)chamber中細(xì)刻9個(gè)1mm2大正方形,，其中4個(gè)角落之正方形再細(xì)刻16個(gè)小格,，深度均為0.1mm。當(dāng)chamber上方蓋上蓋玻片后,，每個(gè)大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml,。使用時(shí)，計(jì)數(shù)每個(gè)大正方形內(nèi)之細(xì)胞數(shù)目,，乘以稀釋倍數(shù),，再乘以104，即為每ml中之細(xì)胞數(shù)目,。
(3)存活測(cè)試之步驟為dyeexclusion,，利用染料會(huì)滲入死細(xì)胞中而呈色，而活細(xì)胞因細(xì)胞膜完整,，染料無(wú)法滲入而不會(huì)呈色,。一般使用藍(lán)色之trypan blue染料，如果細(xì)胞不易吸收trypan blue,，則用紅色之Erythrosin bluish,。計(jì)算細(xì)胞活率：活細(xì)胞數(shù)/(活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù))×100%。計(jì)數(shù)應(yīng)在臺(tái)盼蘭染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成,，隨時(shí)間延長(zhǎng),，部分活細(xì)胞也開(kāi)始攝取染料;因?yàn)榕_(tái)盼蘭對(duì)蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的親和力，用不含血清的稀釋液,，可以使染色計(jì)數(shù)更為準(zhǔn)確,。