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Cell Counting Kit（CCK-8）試劑盒
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒 | 40203ES60* | 100 T | 150.00 |
Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒 | 40203ES76* | 500 T | 480.00 |
Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒 | 40203ES80* | 1000 T | 920.00 |
Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒 | 40203ES88* | 3×1000 T | 1833.00 |
Cell Counting Kit（CCK-8）CCK-8試劑盒 | 40203ES92* | 10×1000 T | 5122.00 |
檢測原理
Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒,，是一種基于WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
WST-8屬于MTT的升級產品,，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下,，可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比,，與細胞毒性成反比,。使用酶標儀在450nm波長處測定OD值，間接反映活細胞數(shù)量,。
CCK-8法應用非常廣泛,，如藥物篩選、細胞增殖測定,、細胞毒性測定,、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。
保存條件
4℃干燥避光保存,，有效期一年（推薦）,。-20℃干燥避光保存，有效期二年,。
CCK-8方法的優(yōu)勢
1）表1 CCK-8法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優(yōu)勢比較
檢測方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK-8法 |
甲臜產物的水溶性 | 差（需加有機溶劑溶解后再檢測） | 好 | 好 | 好 |
產品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
使用方法 | 配成溶液后使用 | 現(xiàn)配現(xiàn)用 | 即開即用 | 即開即用 |
檢測靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
檢測時間 | 較長 | 較短 | 較短 | 短 |
檢測波長 | 560-600 nm | 420-480 nm | 420-480 nm | 430-490 nm |
細胞毒性 | 高,，細胞形態(tài)*消失 | 很低，細胞形態(tài)不變 | 很低,，細胞形態(tài)不變 | 很低,，細胞形態(tài)不變 |
試劑穩(wěn)定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
批量樣品檢測 | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
2）酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；
3）細胞毒性非常低,，因此加入WST-8顯色后,，可以在不同時間反復用酶標儀讀數(shù)從而找到*測定時間,。
注意事項
1）建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間,。
2）有條件的情況下建議采用多通道移液器,，可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時,，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加,，不要插到培養(yǎng)基液面下加，容易產生氣泡,，會干擾OD值讀數(shù),。
3）白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
4）如果沒有450 nm的濾光片,，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片,，但是450 nm濾光片的檢測靈敏度zui高。
5）培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時,，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,，因此不會對檢測造成影響。
6）為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
CCK-8試劑盒操作說明
一. 制作標準曲線（測定細胞具體數(shù)量）
1、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,，然后接種細胞到培養(yǎng)板內,。
2、按比例（例如：1/2比例）依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,，一般要做3-5個細胞濃度梯度,，每個濃度建議3-6個復孔。
3,、接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁,，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)1-4 h后測定OD值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標（X軸）,，OD值為縱坐標（Y軸）的標準曲線,。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量（使用此標準曲線的前提是實驗的條件要*，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間,。）
【注】當使用標準96孔板時,，貼壁細胞的小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基),。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量,，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液,。
二. 細胞活性檢測
1,、在96孔板中接種細胞懸液（100 μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)一段時間（37℃,，5% CO2）,。
2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時,。
4,、用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。
5,、若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內測定,，吸光度不會發(fā)生變化。
三. 細胞增殖-毒性檢測
1,、在96孔板中配制100 μL的細胞懸液,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時（37℃，5% CO2）,。
2,、向培養(yǎng)板中加入10 μL不同濃度的待測物質。
3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6,、12、24或48小時）,。
4,、向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）,。
5,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。
6,、用酶標儀測定在450 nm處的吸光度,。
7、若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化,。
【注】如果待測物質有氧化性或還原性的話,，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可,。
活力計算
細胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] ×100
A（加藥）：具有細胞,、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A（0加藥）：具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力
HB190726
翌圣生物科技（上海）股份有限公司 - 主營產品： 抗體,小分子抑制劑,熒光染料,干細胞培養(yǎng),血清
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