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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年
60724ES（FC）含量檢測試劑盒 微量法
| 參考價(jià) | ￥785 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 60724ES 型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
規(guī)格
| 100 | 785元 | 99 件 可售 |
訪問次數(shù)：262更新時(shí)間：2024-02-18 16:38:05
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 兩周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡介
游離膽//固//醇(FC)是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分，也是合成性激素,、膽汁酸,、維生素D和腎上腺皮質(zhì)激素等物質(zhì)的重要原料，F(xiàn)C濃度可作為脂代謝的指標(biāo),。本試劑盒的檢測方法是微量法,，既可以用可見分光光度計(jì)檢測，也可以用酶標(biāo)儀檢測,。該產(chǎn)品的檢出限是0.119 μmol/mL,，線性范圍為0.125-6 μmol/mL。
作用原理是FC氧化酶可催化FC生成4-膽甾烯酮和H2O2,，過氧化物酶催化H2O2,、4-氨基安//替//比//林和酚生成紅色醌類化合物，其在500 nm有吸收峰,，顏色深淺與FC含量成正比,。作用方式如下：
測定總膽//固//醇(TC)請(qǐng)選擇60723ES 總膽//固//醇(TC)含量檢測試劑盒；測定游離膽//固//醇(FC)請(qǐng)選擇60724ES 游離膽//固//醇(FC)含量檢測試劑盒,。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 60724ES60 |
規(guī)格 | 100 T |
組分信息
組分編號(hào) | 組分名稱 | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 |
60724-A | 工作液 | 20 mL | 2~8℃ |
60724-B | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 10 mg | 2~8℃ |
儲(chǔ)存條件
2~8℃保存,，有效期6個(gè)月。
使用說明
【注意事項(xiàng)】實(shí)驗(yàn)之前建議選擇3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),，如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi),，建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和溶劑：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、天平,、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱,、微量玻璃比色皿/96孔板,、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、可調(diào)式移液槍,、EP管,、蒸餾水和異丙醇。
溶液的配制：
1）自備提取液異丙醇：大約需要110 mL,，常溫保存,；試劑盒內(nèi)提供一個(gè)30 mL棕色空瓶,，僅做分裝使用,。
2）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配置：10 mg膽//固//醇使用前加入517 μL提取液,，振蕩溶解后即為50 μmol/mL的膽//固//醇標(biāo)準(zhǔn)溶液,，2~8℃可保存4周。
3）標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：取50 μmol/mL膽//固//醇標(biāo)準(zhǔn)液20 μL ,，加入480 μL異丙醇,，充分混勻，配制成2 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。注意2 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液最好現(xiàn)配現(xiàn)用，實(shí)驗(yàn)中每管需10 μL，但為減小實(shí)驗(yàn)誤差,，故配制體積偏大。
3. 操作步驟
1）樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
a. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1 g組織,，加入1 mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿,。8000 g，4℃離心10 min,，取上清置冰上待測,。
b. 細(xì)菌/細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1 mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300 w,，超聲2秒,，間隔3秒，總時(shí)間3 min）,；然后 8000 g,，4℃離心10 min,， 取上清置于冰上待測。
c. 血清（漿）等液體樣本：直接測定,，若有沉淀請(qǐng)離心后取上清待測,。
2）測定步驟
a. 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至500 nm,，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零,。
b. 按需取出一定量的工作液，37℃水浴預(yù)熱30 min,。
c. 在1.5 mL EP管/96孔板按下表步驟加樣
試劑名稱（µL） | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
異丙醇 | 10 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)液 | - | 10 | - |
待測上清 | - | - | 10 |
工作液 | 190 | 190 | 190 |
充分混勻,，室溫靜置15 min，反應(yīng)完成后測定500 nm處吸光值A(chǔ),，分別記為A測定,、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白，ΔA測定=A測定-A空白,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白,。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測1-2個(gè),。注：若樣本為血清,，則空白管中的提取液（異丙醇）需要更換為蒸餾水進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 | |||
總膽//固//醇含量計(jì)算
a. 血清（漿）中 FC 含量計(jì)算：
FC含量（μmol/dL）=C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測定-A空白）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×100=200×（A測定-A空白）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）
b. 組織或細(xì)胞,、細(xì)菌中 FC 含量計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：FC含量（μmol/mg prot）=C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測定-A空白）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）×V樣總÷（Cpr×V樣總）=2×（A測定-A空白）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算：FC 含量（μmol/g 質(zhì)量）=C 標(biāo)準(zhǔn)液×（A測定-A空白）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V樣總÷W=2×（A測定-A空白）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷W
（3）按細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算：FC 含量(μmol/104 cell）=C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定-A空白）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V樣總÷N=（A測定-A 空白）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）
C 標(biāo)準(zhǔn)液：標(biāo)準(zhǔn)液的濃度,，2 μmol/mL,；V 樣總：加入提取液的體積,，1 mL,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g,；100：單位換算系數(shù)，1 dL=100 mL；500：細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量,，500萬,；N：細(xì)胞數(shù)量，以萬計(jì),。
4. 實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取 0.1 g 大鼠肝臟加入 1 mL 提取液進(jìn)行勻漿研磨,，取上清后按照測定步驟操作,，使用 96孔板測得A空白=0.046、A標(biāo)準(zhǔn)=0.354,、A測定=0.127,，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：
FC含量（μmol/g 質(zhì)量）=2×（A測定-A空白）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷W =5.320 μmol/g 質(zhì)量。
注意事項(xiàng)
如果樣本吸光值大于1.2,，建議將樣本用提取液稀釋后進(jìn)行測定,。
提取液中含有使蛋白變形的成分,，故按蛋白濃度計(jì)算時(shí)需要重新提取蛋白進(jìn)行測定。
為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
本產(chǎn)品僅作科研用途！
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