聯(lián)系電話
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級會員·13年
10187ESPlant Tissue PCR Kit (With Dye)
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 10187ES 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：264更新時(shí)間：2025-02-07 13:14:33
聯(lián)系我們時(shí)請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,，謝謝!
- 聯(lián)系人：
- 曹女士
- 電話：
- 400-6111-883
- 手機(jī)：
- 售后：
- 4006-111-883
- 傳真：
- 86-21-34615995
- 地址：
- 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號3樓
- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡介
Plant Tissue Direct PCR Kit (With Dye)植物組織直接PCR試劑盒是一款可直接對不同類型植物葉片進(jìn)行PCR擴(kuò)增的試劑盒,，適應(yīng)性廣,、穩(wěn)定性強(qiáng)。試劑盒采用的裂解緩沖液體系,，可以快速的裂解多種植物樣品并釋放出基因組DNA,，不需要除去蛋白、RNA或次生代謝產(chǎn)物等,，即可將釋放出的基因組DNA作為模板直接用于PCR反應(yīng),。此外，樣品使用量少,，低至1 mm植物葉片即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。
本試劑盒中提供的2× Plant Master Mix具有很強(qiáng)的擴(kuò)增兼容性，能直接以待測樣品裂解液為模板,，進(jìn)行高效特異性擴(kuò)增,。該試劑為2倍濃縮PCR反應(yīng)混合液，包含了用于PCR擴(kuò)增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程,，降低污染幾率,。
該試劑盒可用于轉(zhuǎn)基因植株鑒定、植物基因分型等,。
組分信息
類別 | 組分編號 | 組分名稱 | 10187ES05 | 10187ES50 | 10187ES70 |
Part I | 10187-A | Buffer P1 | 250 μL | 1.25 mL × 2 | 5 mL × 2 |
10187-B | Buffer P2 | 50 μL | 500 μL | 1 mL × 2 | |
Part II | 10187-C | 2 × Plant Master Mix* | 50 μL | 500 μL | 1 mL × 2 |
*2× Plant Master Mix：包含熱啟動Taq DNA聚合酶,、dNTP混合物、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液,、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等,，同時(shí)包含電泳Loading Buffer,，PCR完成之后可直接電泳。
儲存條件
1. 試劑10187-A【Buffer P1】,，置于2-8℃保存,。有效期1年。
2. 試劑10187-B【Buffer P2】,，中和裂解產(chǎn)物,，利于更長時(shí)間保存樣本，置于2-8℃保存,。有效期1年,。
3. 試劑10187-C【2 × Plant Master Mix】，-25~-15℃保存,，避免反復(fù)凍融,。有效期1年。
使用說明
植物葉片
1,、研磨裂解法：
a. 研磨儀破碎：將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中,，用研磨儀加鋼珠（鋼珠直徑3mm左右，共2個(gè)）破碎葉片（45 Hz,，1 min）,，葉片破碎后溶液呈現(xiàn)綠色，瞬時(shí)離心,，上清液請放在4℃?zhèn)溆?，? μL用于PCR擴(kuò)增。
b. 槍頭搗碎：推薦使用幼嫩葉片,。將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中,，用槍頭將葉片搗碎，搗碎后溶液呈現(xiàn)綠色,，瞬時(shí)離心,，上清液請放在4℃?zhèn)溆?，? μL用于PCR擴(kuò)增。
1,、加熱裂解法：推薦使用幼嫩葉片,。將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中，95℃加熱5-10 min（確保裂解液 浸沒葉片）,，較難裂解的葉片（老葉片）可適當(dāng)延長時(shí)間（10-20 min），加熱裂解后溶液呈現(xiàn)綠色,，震蕩混勻,，瞬時(shí)離心，上清液請放在4℃?zhèn)溆?，? μL用于PCR擴(kuò)增,。
1、直接法：推薦使用幼嫩葉片,。使用打孔器或者刀,，將直徑1 mm左右的葉片直接加入到PCR反應(yīng)體系中；復(fù)雜樣本或者是長片段的擴(kuò)增,，推薦使用直徑<1 mm的葉片,。
PCR反應(yīng)體系
組分 | 體積（μL） | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Plant Master Mix | 10 | 25 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
裂解產(chǎn)物（DNA模板） | 1 | 2 | - |
ddH2O | To 20 | To 50 | - |
表1 反應(yīng)體系
【注】：各組分使用前應(yīng)充分混勻。
模板加入量：小于PCR反應(yīng)體系的5%,，過多會嚴(yán)重抑制PCR反應(yīng),，強(qiáng)烈推薦加入1 μL模板。葉片直擴(kuò)優(yōu)先推薦研磨儀裂解法,。
引物終濃度：0.2-0.25 μM可以得到較好結(jié)果,。反應(yīng)性能較差時(shí)，可在0.1-0.5 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度,。
反應(yīng)體系：推薦使用20 μL或50 μL,，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。
體系配制：配制好PCR反應(yīng)體系,，置于渦旋儀上渦旋混勻,，瞬時(shí)離心將反應(yīng)液集于管底。
對照反應(yīng)：建議進(jìn)行PCR時(shí),，設(shè)置陽性和陰性PCR對照反應(yīng)以便于排除假陽性或假陰性的干擾,。
為了更穩(wěn)定的保存裂解后的模板，將轉(zhuǎn)移出來的上清液,，按照裂解產(chǎn)物（DNA模板）：Buffer P2 = 5:1的比例混合,，混勻后-20℃保存，穩(wěn)定保存隨時(shí)間和樣本狀態(tài)不同而有所不同,。如果處理后的植物葉片上清液一周內(nèi)用于PCR擴(kuò)增,，不用加Buffer P2,，上清液請保存在-20℃。
反應(yīng)條件
循環(huán)步驟 | 溫度 (°C) | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94 | 5 min | 1 |
變性 | 94 | 10 sec | 35 |
退火 | 50-65 | 20 sec | |
延伸 | 72 | 1 min/kb | |
終延伸 | 72 | 5 min | 1 |
表2 反應(yīng)條件 | |||
【注】：
退火溫度：請參考引物的理論 Tm 值,，退火溫度可設(shè)置低于引物理論值 2-5℃,。
延伸時(shí)間：需要根據(jù)片段的長度來確定，對于1 kb以內(nèi)的DNA片段,，建議延長時(shí)間為1 min,。
注意事項(xiàng)
做葉片實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議使用新鮮采取的葉片組織,，若為長期冷凍組織,，需-80℃保存，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,，以免造成模板降解,，影響PCR效率。葉片組織以幼嫩為宜,，若為成熟的葉片,，避免使用葉片主脈部位組織。
建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi),，以便擴(kuò)增效率佳,。
取樣時(shí)使用打孔器或者刀取適宜大小的樣本，樣本不同時(shí),，打孔器或者刀每次處理樣本前需清洗干凈,。
對于葉片組織，建議取1-10 mm的葉片,，過小會使PCR擴(kuò)增產(chǎn)量低,，過多會抑制PCR反應(yīng)，采用加熱裂解法,、槍頭搗碎,、研磨儀破碎的方式處理植物葉片，處理后需震蕩離心,，務(wù)必取上清液試驗(yàn),，沉淀會嚴(yán)重抑制PCR反應(yīng)。
為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作,。
本產(chǎn)品僅作科研用途！
常見問題與解決方法
常見問題 | 可能原因 | 解決方法 |
陽性對照,、待測樣本均無條帶 | PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適,。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反應(yīng)條件。 |
PCR試劑保存不當(dāng)失去活性,。 | 2× PCR Mix應(yīng)保存于-20℃,，使用時(shí)避免反復(fù)凍融,。若使用頻繁，可在4℃短時(shí)間存放,。 | |
引物設(shè)計(jì)問題,。 | 嘗試重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。 | |
陽性對照有目的條帶,，待測樣本無條帶或條帶弱 | 裂解液,、中和液加入比例不當(dāng)，裂解混合液影響PCR體系的pH值,。 | 正常條件下,，中和后的裂解混合液的pH應(yīng)該在7-8左右（裂解產(chǎn)物和Buffer P2嚴(yán)格按照5:1的量進(jìn)行中和）。 |
樣本裂解混合液保存不當(dāng)或保存時(shí)間過久,，DNA基因組已經(jīng)降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存5天,，盡量使用新制備的裂解液混合液進(jìn)行PCR,。 | |
模板加入量不適合。 | 在反應(yīng)體系<5%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量,。 | |
PCR循環(huán)數(shù)不足,。 | 適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦35-40循環(huán)為佳,。因模板復(fù)雜,，一般PCR反應(yīng)要比用純化的DNA模板多5-10個(gè)循環(huán)為佳。 | |
非特異性擴(kuò)增 | PCR退火溫度太低,，循環(huán)數(shù),、引物濃度或模板濃度太高。 | 增加PCR退火溫度,，降低PCR循環(huán)數(shù),、引物濃度或模板濃度。 |
PCR引物錯(cuò)配,。 | 重新設(shè)計(jì)PCR引物,。 | |
配制PCR反應(yīng)體系時(shí)溫度太高或配制完成后放置時(shí)間太久。 | PCR反應(yīng)體系的配制在低溫下進(jìn)行,，配制完成后盡快進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),。 | |
陰性對照出現(xiàn)目的條帶 | 操作工具或試劑污染。 | 實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌,。操作時(shí)應(yīng)小心輕柔,，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。 |
樣本間交叉污染,。 | 每個(gè)取樣器只對一個(gè)樣本使用,；或取完一個(gè)樣本后,，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復(fù)涮洗,，然后用干凈的紙巾擦干殘液,。 |
