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40101ESTrypsin 1:2501:250(粉末)
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具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 40101ES 產(chǎn)品型號(hào)
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- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：227更新時(shí)間：2025-02-07 13:36:30
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品描述
（Trypsin）是一種普遍發(fā)現(xiàn)于脊椎動(dòng)物消化系統(tǒng)的蛋白酶，能水解蛋白,，以無(wú)活性的原（trypsinogen）的形式分泌于胰腺中,。其切割肽鏈的位點(diǎn)主要位于或的羧基端（二者緊接的情況除外）。包括兩個(gè)亞基,，α亞基（有2個(gè)多肽鏈構(gòu)成）和β亞基（有1個(gè)多肽鏈構(gòu)成）,。其水解活性可被多種抑制劑抑制，包括：1）有機(jī)磷化合物,，如氟磷酸異丙酯,；2）來(lái)源于胰腺、大豆,、青豆,、蛋清的天然抑制劑；3）銀離子,；4）特定蛋白酶抑制劑,，如AEBSF、DFP,、PMSF,、TLCK等,；
本品是來(lái)源于的凍干粉，經(jīng)γ射線處理滅活病毒,，酶活≥ 250 units/mg,。廣泛用于細(xì)胞傳代，將貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)板上消化水解下來(lái)制備單細(xì)胞懸液,，常用的工作濃度是0.25-5%（w/v）,。
產(chǎn)品性質(zhì)
中文別名（Chinese synonym） | ，豬胰臟來(lái)源,； |
英文別名（English synonym） | Trypsin, porcine pancreas; Parenzyme; Tryptar; Trypure; Parenzymol; U-4858; |
CAS號(hào)（CAS NO.） | 9002-07-7 |
分子量（Molecular weight） | 23.8 kDa |
外觀（Apperance） | 白色至類白色粉末 |
消光系數(shù)（Extinction coefficient） | E1%280=14.3 |
等電點(diǎn)（Isoelectric Point） | pH 10.5 |
溶解性（Solubility） | 溶于水,，幾乎不溶于乙醇和甘油 |
比活力（Specific activity）* | ＞250 U/mg |
*活力定義（Unit definition）：The activity causing a change in absorbance of 0.003/minute at 253 nm. | |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。凍干粉2~8℃干燥保存,，有效期2年,。
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
2）胰蛋白凍干粉產(chǎn)品常遇到的活性定義及其轉(zhuǎn)換,，
1 BAEE U：在25℃，pH 7.6 的條件下,，以BAEE為底物，3.2 mL的反應(yīng)體系中,，A253吸光值每分鐘會(huì)發(fā)生0.001的變化即為一個(gè)酶活單位,。
1 TAME U：在25℃，pH 8.2,，0.001 M的Ca2+的條件下,，每分鐘水解 1 μM的TAME 的樣品量。
1 USP U：在條件下,，每分鐘引起吸光值發(fā)生0.003的變化的樣品活性,。
1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit
3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法（用于貼壁細(xì)胞的消化）
1. 濃縮液（0.25%）的配置
稱取0.25 g粉末溶于100 mL HBSS（無(wú)鈣,，鎂）緩沖液,，并調(diào)整pH在7.4-7.6范圍。此時(shí)得到的即0.25%濃縮液,，置于4℃短時(shí)間保存,，3個(gè)月相對(duì)穩(wěn)定。建議分裝凍存,，利于長(zhǎng)期保存,。解凍后可能會(huì)出現(xiàn)少量沉淀，屬于正?，F(xiàn)象,，不會(huì)影響其使用效力,。
【注】凍干粉也可溶于其他不含鈣鎂離子的平衡鹽緩沖液如PBS。
細(xì)胞的消化可以直接用溶液,，但通常使用的是-EDTA溶液,，因?yàn)镋DTA是一種II價(jià)金屬離子螯合劑，能夠螯合鈣鎂離子,，減少細(xì)胞間的粘附性,，從而增強(qiáng)的活性。
2. -EDTA溶液的配制(0.25%(w/v))：
無(wú)Ca2+,、Mg2+及酚紅的 | To 500 mL |
1.25 g | |
EDTA | 0.10 g |
3. 貼壁細(xì)胞的消化
方法一
1）移除培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液,，用不含Ca2+、Mg2+的緩沖液清洗單層貼壁細(xì)胞,，直至清除殘余血清,，吸除鹽溶液。
2）向上述貼壁細(xì)胞中加入適量-EDTA溶液,，至覆蓋細(xì)胞即可,。
3）傾斜培養(yǎng)板，吸取-EDTA溶液,，反復(fù)吹洗細(xì)胞數(shù)次,，注意消化時(shí)間不可過(guò)長(zhǎng)。
【注】消化時(shí)間跟細(xì)胞類型,、細(xì)胞密度,、所用血清濃度、活性,、以及消化前細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間有關(guān),。
4）將細(xì)胞于室溫孵育直至細(xì)胞分離，期間可將細(xì)胞培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察,，避免細(xì)胞過(guò)度消化,，從而避免對(duì)細(xì)胞造成的損傷。
5）加入10 mL細(xì)胞培養(yǎng)液,，輕輕反復(fù)吹吸從而將細(xì)胞從培養(yǎng)板底盡可能吹離,，吹洗時(shí)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
6）進(jìn)行下一步操作或?qū)⒓?xì)胞凍存,。
【注】操作時(shí)務(wù)必小心謹(jǐn)慎,，同時(shí)時(shí)刻注意避免交叉污染發(fā)生的可能性。
方法二
以25 cm2 T-Flask為例,，
1）無(wú)菌條件下吸除培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液,。
2）加入3 mL冰的-EDTA溶液（配方同上）。
3）孵育30 s（或更長(zhǎng),，如果需要）,。置于低倍鏡觀察,，如果有部分細(xì)胞開(kāi)始變圓脫離培養(yǎng)瓶壁，此時(shí)可吸除溶液,，繼續(xù)孵育至細(xì)胞脫落,。
4）加入10 mL新鮮MEM培養(yǎng)液，可用槍快速的將培養(yǎng)液加入,，有助于使細(xì)胞脫落,；然后使用相同的槍頭，輕輕地多次吹洗細(xì)胞并混勻后,，吸取其中5 mL于一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中,。
5）置培養(yǎng)條件下孵育。
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