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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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60209ES10嘌呤霉素鹽酸鹽溶液
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 60209ES10 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：405更新時(shí)間：2025-02-07 13:38:38
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,制藥/生物制藥 |
|---|
產(chǎn)品介紹
嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑鏈霉菌(Streptomyces alboniger)發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,，通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽性菌,，各種動(dòng)物和昆蟲細(xì)胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌,。作用機(jī)制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3′末端的類似物,，能夠與核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點(diǎn)結(jié)合后，不會(huì)參與隨后的任何反應(yīng),，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽,。
嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAC)，賦予機(jī)體對(duì)嘌呤霉素產(chǎn)生抗性,。這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,。
嘌呤霉素在細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應(yīng)用與慢病毒載體的特性有關(guān)，現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因,。在某些特定情況下,，嘌呤霉素亦可以用來篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。
本品是無菌的,、溶于蒸餾水的嘌呤霉素鹽酸鹽溶液,，濃度為10 mg/mL（10 mg/mL in H2O），可直接用培養(yǎng)基或其他緩沖溶液稀釋使用,，適用于細(xì)胞培養(yǎng),，常用工作濃度為1~10 µg/mL。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 60209ES10/60209ES50/60209ES60/60209ES76 |
規(guī)格 | 1×1 mL/5×1 mL/10×1 mL/50×1 mL |
CAS號(hào)（CAS NO.） | 58-58-2 |
分子式（Molecular Fomular） | C22H29N7O5·2HCl |
分子量（Molecular Weight） | 544.43 g/mol |
純度（Purity） | ≥98% |
外觀（Appearance） | 溶液 |
濃度 （Concentration） | 10 mg/mL（溶于水） |
結(jié)構(gòu)（Structure） |
|
組分信息
組分名稱 | 60209ES10 | 60209ES50 | 60209ES60 | 60209ES76 |
規(guī)格 | 1×1 mL | 5×1 mL | 10×1 mL | 50×1 mL |
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存,，有效期1年,。
使用說明
1. 建議使用濃度
哺乳動(dòng)物細(xì)胞：1~10 μg/mL，最佳濃度需要?dú)缜€來確定,。推薦濃度,，請(qǐng)看表1。
大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌,，使用濃度為125 μg/mL,。
【注】：使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要精確的pH值調(diào)節(jié)，而且受宿主細(xì)胞本身的影響,。
表1 嘌呤霉素鹽酸鹽的推薦濃度
細(xì)胞系 | 嘌呤霉素濃度 | 參考文獻(xiàn) |
B16（小鼠黑素細(xì)胞） | 1~2 μg/mL | [1],[2] |
HEK293（人胚胎腎細(xì)胞） | 0.5~10 μg/mL | [3] |
HeLa（人宮頸癌細(xì)胞） | 1~10 μg/mL | [4],，[5] |
MEF（小鼠成纖維細(xì)胞） | 1-5 μg/mL | [4] |
HepG2（人肝細(xì)胞癌） | 0.5~5 μg/mL | [6]，[7] |
A549（肺癌細(xì)胞） | 1.5 μg/mL | [8] |
人胚胎干 (ES) 細(xì)胞 | 0.5~5 μg/mL | [9] |
嘌呤霉素殺滅曲線的確定（以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)為例）
嘌呤霉素有效篩選濃度跟細(xì)胞類型,、生長(zhǎng)狀態(tài),、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝情況及細(xì)胞所處細(xì)胞周期位置等有關(guān),。為了篩選到穩(wěn)定表達(dá)的shRNA細(xì)胞株,，確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的濃度嘌呤霉素至關(guān)重要。建議初次做實(shí)驗(yàn)的客戶一定要建立適合自身實(shí)驗(yàn)體系的殺死曲線(kill curve),。
1）Day 1：24孔板內(nèi)以5~8×104 cells/孔的密度鋪板,，鋪?zhàn)銐蛄康目祝源_保后續(xù)的梯度實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行,，37℃細(xì)胞孵育過夜,。
2）Day 2：①準(zhǔn)備篩選培養(yǎng)基：含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基（如0~15 μg/mL,，至少5個(gè)梯度）；②往孵育過夜后的細(xì)胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基,；之后37℃孵育細(xì)胞,。
3）Day 4：更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察細(xì)胞存活率,。
4）根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),，約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基。
5）每日監(jiān)測(cè)細(xì)胞,，觀察存活細(xì)胞率,，確定抗生素篩選開始4~6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或所有非轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的藥物濃度。
3. 哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選
等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后,，細(xì)胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖,，以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。
1）細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后,，將細(xì)胞（原樣或稀釋）置于含有適當(dāng)濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng),。
【注】：當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時(shí)，抗生素作用,。細(xì)胞過于密集,，抗生素產(chǎn)生的效力會(huì)明顯下降。最好進(jìn)行細(xì)胞分盤使其密度不超過25%,。
2）每隔2~3天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基,。
3）篩選7天后評(píng)估細(xì)胞形成的病灶,。病灶可能需要額外的一周或者更多時(shí)間，這依賴于宿主細(xì)胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率,。
【注】：每日進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察,。嘌呤霉素的篩選至少需要48 h，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天,。
4）轉(zhuǎn)移和放置5~10個(gè)抗性克隆到一個(gè)35 mm的培養(yǎng)皿中,，用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備,。
注意事項(xiàng)
1.嘌呤霉素為有毒化合物,，操作時(shí)請(qǐng)小心拿放。
2.為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
3.本產(chǎn)品僅用于科研用途，禁止用于人身上,。
參考文獻(xiàn)
[1] Furge KA. et al., 2001. Suppression of Ras-mediated tumorigenicity and metastasis through inhibition of the Met receptor tyrosine kinase. PNAS 98:10722-7.
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[3] R?ssger K. et al., 2013. Reward-based hypertension control by a synthetic brain-dopamine interface. PNAS, 110:18150-5.
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[5] Charnaux N. et al., 2005. RANTES (CCL5) induces a CCR5-dependent accelerated shedding of syndecan-1 (CD138) and syndecan-4 from HeLa cells and forms
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客戶使用本產(chǎn)品發(fā)表的科研文獻(xiàn)（部分）
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[4] Han L, et al. Uterus globulin associated protein 1 (UGRP1) binds podoplanin (PDPN) to promote a novel inflammation pathway during Streptococcus pneumoniae infection. Clin Transl Med. 2022 Jun;12(6): e850. doi: 10.1002/ctm2.850. PMID: 35652821; PMCID: PMC9161880.
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