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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

NHS活化磁珠(NHS-Activated MagBeads)是一種預(yù)活化的聚合物磁性微球,，表面為NHS 基團(tuán)修飾，能夠與含氨基的蛋白或多肽的偶聯(lián),，其主要用于親和純化或者分析檢測抗體,、抗原和其他生物分子。為任何所需蛋白質(zhì)偶聯(lián)到磁珠表面提供了一種便利的方式,。與傳統(tǒng)的羧基,、氨基磁珠相比，表面含NHS基團(tuán)的磁珠無需事先采EDC/NHS或戊二醛進(jìn)行活化,，只需簡單地將含氨基的生物配體溶解于偶聯(lián)緩沖液中,，將蛋白溶液與磁珠孵育2-4h便可將生物配體,，通過 NHS-酯化學(xué)共價偶聯(lián)到磁珠上。這一過程不需要危險化學(xué)品或冗長的反應(yīng)方案,，具有操作簡單,、偶聯(lián)條件溫和、生物配體偶聯(lián)快速高效的優(yōu)點,。

活化的磁珠含有能與伯胺反應(yīng)以形成穩(wěn)定的酰胺鍵的 N-羥基-琥珀酰亞胺 (NHS) 功能基團(tuán),。一旦它們共價連接，固定的蛋白不會從磁珠表面浸出,。在實驗中使用制備的磁珠時,，非特異性結(jié)合可忽略不計，因為在偶聯(lián)程序中,，非反應(yīng) NHS-酯基團(tuán)被*封閉,。NHS 活化磁珠可通過手動磁力架進(jìn)行偶聯(lián)和處理。偶聯(lián)后,，制備的磁珠通常用于親和純化程序,。

該磁珠適用于含氨基的蛋白、抗體,、酶,、多肽、核酸等生物分子的共價偶聯(lián),。偶聯(lián)后,，制備的磁珠可應(yīng)用于免疫檢測、免疫沉淀,、免疫共沉淀,、蛋白/抗體分離純化等實驗。該產(chǎn)品生物配基偶聯(lián)效率高,，可高效簡單偶聯(lián)且共價偶聯(lián)穩(wěn)定,，可避免抗體與目標(biāo)蛋白的共洗脫，其實際使用效果可替代DynaBeads Antibody Coupling kit,。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸和保存方法

冰袋運輸,。-20℃儲存，有效期2年,。

注意事項

1.為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2.本產(chǎn)品僅作科研用途,！

使用方法

一,、緩沖液配制

所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾。

清洗液：1 mM HCI

偶聯(lián)液：0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCI, pH8.0

封閉液：0.5 M 乙醇胺，0.5 M NaCI, pH8.3 或 0.1 M Tris, pH8.5

清洗液1：0.1 M乙酸-乙酸鈉,，0.5 M NaCI, pH3.0

清洗液 2：0.1 M Tris-HCI, 0.5 M NaCI, pH8.0

保護(hù)液: PBS , 0.01% Tween-20,0.02% NaN3

【注】偶聯(lián)液可以選擇碳酸鹽,、磷酸鹽等不含氨基的緩沖液體系。緩沖液體系中加入一定濃度的鹽離子減少非特異性吸附,。

二,、樣本制備

樣品用偶聯(lián)液溶解，濃度約5-10 mg/ml,。

三,、抗原偶聯(lián)

1 .取適量磁珠，吸去保護(hù)液,，用1 mM HCI清洗液清洗一次,，再用偶聯(lián)液清洗一次。磁珠加入清洗液,，混勻后立刻放在磁力架上吸附,，吸棄上清?？梢赃x用預(yù)冷的溶液快速清洗,，減少預(yù)活化介質(zhì)的水解。

溶解好的樣品加入至清洗好的磁珠中,，磁珠：樣品溶液體積比約1:1-2,。

28°C振蕩反應(yīng)2-4 h或4°C過夜。確保磁珠懸浮起來,，否則會大大影響偶聯(lián)效率。

反應(yīng)完后收集偶聯(lián)樣品,，以便檢測偶聯(lián)效率,。去離子水清洗磁珠，加入2倍磁珠體積的封閉液,，28°C振蕩反應(yīng)1 h,。

【注】偶聯(lián)后無法用紫外吸收測定上清蛋白濃度，建議用電泳或者BCA定量法檢測偶聯(lián)效率,。

將上述反應(yīng)體系取出,，流干其中的封閉液，用3倍磁珠體積的去離子水清洗磁珠,，清洗液1,、去離子水、清洗液2和去離子水重復(fù)沖洗2 次,，然后以10 mg/ml的濃度保存在保護(hù)液中,，于2-8°C保存。

四、純化流程

以磁珠偶聯(lián)抗體,，純化抗原為例的純化步驟,。

4.1緩沖液的準(zhǔn)備

【注】所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾。

平衡/洗雜液：0.15 M NaCI, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0

洗脫液：0.1 M甘-氨酸,，pH 3.0

中和液：1 M Tris-HCI, pH 8.5

4.2磁珠預(yù)處理  將偶聯(lián)好的磁珠混合均勻,，取計算量（根據(jù)上樣量和磁珠載量計算）的磁珠懸浮液（后文均以100 μL為例），轉(zhuǎn)移至離心管中,，放置在磁分離器上,，靜置大約1 min，待溶液變澄清后,，用移液器吸棄上清液,。再將離心管從磁分離器上取下來，加入與所取磁珠懸浮液等體積（100 μL）的平衡液,，使用槍頭反復(fù)吹打5次,，將離心管置于磁分離器上，大約1min,，待溶液變澄清后,，用移液器吸棄上清液，重復(fù)洗滌2次,。

4.3樣品吸附 在預(yù)處理的磁珠中加入樣品溶液,，漩渦振蕩均勻，在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管,，使樣品和磁珠充分接觸并吸附,，混合30 min以上，置于磁分離器上,，大約1min,，待溶液變澄清后，吸棄上清液,。

4.4洗雜  向離心管中加入初始磁珠懸浮液5倍體積（500 μL）的洗雜液,，振蕩懸浮，混合1-2 min,，然后置于磁分離器上,，大約1 min，待溶液變澄清后,，吸棄上清液,。該操作重復(fù)兩次。

4.5洗脫  在上述離心管中加入3-5倍懸浮液體積（300-500 μL）的洗脫液,，用移液器吹打5次,，然后在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管,，5-10 min后，置于磁分離器上,，大約1 min,，待溶液變澄清后，吸取上清液,，收集洗脫組分,，即為目標(biāo)蛋白。

4.6洗脫組分中和  向洗脫組分中加入洗脫體積十分之一的中和液,，調(diào)節(jié)pH值至7.0-8.0,。

4.7磁珠保存  使用后的磁珠用1 mL洗脫液重懸磁珠，然后置于磁分離器上,，大約1 min,，待溶液變澄清后，吸棄上清液,。該操作重復(fù)兩次,。再加入1 mL 平衡液，懸浮磁珠,，然后置于磁分離器上,，大約1min,待溶液變澄清后，吸棄上清液,。加入保護(hù)液至磁珠濃度為10 mg/mL, 置于2-8℃保存,。

HB220324