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41304ES60E.coli殘留DNA檢測試劑盒
參考價: 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 41304ES60 產(chǎn)品型號
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問次數(shù):714更新時間:2022-07-07 15:32:26

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,,謝謝!
產(chǎn)品簡介
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T
貨號 41304ES60 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥
主要用途 用于定量分析檢測各種生物制品的中間品,、半成品和成品中的CHO殘留DNA含量的試劑
E.coli殘留DNA檢測試劑盒是用于定量分析檢測各種生物制品的中間品,、半成品和成品中的Vero宿主細(xì)胞DNA殘留片段含量的試劑盒,。
產(chǎn)品介紹

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

價格(元)

E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit

E.coli宿主細(xì)胞DNA殘留檢測試劑盒

41304ES50

41304ES60

50T

100T

8895.00

16425.00

產(chǎn)品描述

E.coli宿主細(xì)胞DNA殘留檢測試劑盒是用于定量分析檢測各種生物制品的中間品,、半成品和成品中的E.coli宿主細(xì)胞DNA殘留片段含量的試劑盒,。

本試劑盒采用PCR熒光探針原理,,專一快速的檢測E.coli細(xì)胞的殘留DNA,,其檢測限可以達(dá)到fg平,。試劑盒配套有E.coli DNA Control(DNA定量參考品),。本試劑盒需要與磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒(Cat#18461/18462)配套使用。

產(chǎn)品組分

組分編號

組分名稱

產(chǎn)品編號/規(guī)格

41304ES50(50T)

41304ES60(100T)

41304-A

E.coli qPCR mix

0.9 mL

1.8 mL

41304-B

E.coli Primer&probe mix

100 μL

200 μL

41304-C

DNA Dilution Buffer

2×2 mL

4×2 mL

41304-D

E.coli DNA Control(30 ng/μL)

25 μL

50 μL

【注】:適用機(jī)型(包含但不限于以下儀器):

Bio-Rad:CFX96 Optic Module;

Thermo Scientific:ABI 7500,;ABI QuantStudio 5,;ABI StepOnePlus;

上海宏石醫(yī)療科技:SLAN-96S.

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸,。-20℃儲存,,有效期2年。收到貨后,,建議將D組分E.coli DNA Control儲存于-80℃,,其它組分儲存于-20℃。

注意事項(xiàng)

1. 加樣和配液步驟盡量都在冰上操作,。

2. 每個組分在使用前都應(yīng)充分震蕩混勻,,低速離心。

3. 為了您的安全和健康,,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

4. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

使用方法

一,、E.coli DNA Control的稀釋和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

用試劑盒中提供的DNA Dilution Buffer將E.coli DNA Control進(jìn)行梯度稀釋,,稀釋濃度依次為 300 pg/μL、30 pg/μL,、3 pg/μL,、300 fg/μL、30 fg/μL,。

具體操作如下

1. 將試劑盒中的E.coli DNA Control和 DNA Dilution Buffer置于冰上融化,,待*融化后,輕微振蕩混勻,,低速離心10 sec,。

2. 取6支干凈的1.5 mL離心管,分別標(biāo)記為 3 ng/μL,,①,,②,③,,④,,⑤。

3. 在標(biāo)記為3 ng/μL的1.5 mL離心管中加90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL E.coli DNA Control,,即稀釋為 3 ng/μL,,振蕩混勻后短時間快速離心10 sec,該濃度可分裝置于-80℃短期保存(不超過3個月),,使用時避免反復(fù)凍融,。

4. 在①,,②,③,,④,,⑤管中先分別加入90 μL DNA Dilution Buffer,再進(jìn)行梯度稀釋,,稀釋方法如下:

稀釋管

稀釋比例

終濃度

10 μL 3 ng/μL+90 μL DNA Dilution Buffer

300 pg/μL

10 μL ①+90 μL DNA Dilution Buffer

30 pg/μL

10 μL ②+90 μL DNA Dilution Buffer

3 pg/μL

10 μL ③+90 μL DNA Dilution Buffer

300 fg/μL

10 μL ④+90 μL DNA Dilution Buffer

30 fg/μL

【注】:1. 每個濃度做3個復(fù)孔,。該試劑可測試30 fg/μL-3 ng/μL線性范圍,如需要,,可擴(kuò)大或縮小線性范圍,。

          2. 為減少反復(fù)凍融次數(shù)和避免污染,建議初次使用時將DNA定量參考品分裝儲存于-80℃,。

3. 已融化未使用的DNA Dilution Buffer可保存于2-8℃ 7天,,如長時間不用請放置于-20℃。

4. 為確保模板*混勻,,每個梯度稀釋時需震蕩混勻1 min以上,。

二、加樣回收質(zhì)控QC的制備

根據(jù)需要設(shè)QC中的E.coli DNA加樣濃度(以制備加3 pg/μL DNA量的樣本QC為例),,具體操作如下:

100 μL待測樣本加入1.5 mL干凈的離心管中,,再加入10 μL②,混勻,,標(biāo)記為加樣回收QC,。

加樣回收QC和同批待測樣本一起進(jìn)行樣本前處理,,制備加樣回收QC純化液,。

三、標(biāo)準(zhǔn)品回收質(zhì)控QC的制備(可選)

根據(jù)需要設(shè)QC中的E.coli DNA標(biāo)準(zhǔn)品濃度(以加3 pg/μL DNA 標(biāo)準(zhǔn)品為例),,具體操作如下:

100 μL 3 pg/μL定量參考品的稀釋液加入1.5 mL干凈的離心管中,,標(biāo)記為標(biāo)準(zhǔn)品回收QC。

標(biāo)準(zhǔn)品QC和同批待測樣本一起進(jìn)行樣本前處理,,制備標(biāo)準(zhǔn)品QC純化液,。

四、陰性質(zhì)控NC的制備

根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性質(zhì)控,,具體操作如下:

100 μL樣本基質(zhì)溶液(或DNA Dilution Buffer)加入1.5 mL干凈的離心管中,,標(biāo)記為陰性質(zhì)控NC。

陰性質(zhì)控NC和同批待測樣本一起進(jìn)行樣本前處理,,制備成陰性質(zhì)控NC純化液,。

五、反應(yīng)體系

組分

體積(μL)

E.coli qPCR mix

18

E.coli Primer&probe mix

2

DNA template

20

總體積

40

【注】:1. 根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算本次所需的 qPCR MIX 總量:qPCR MIX =(反應(yīng)孔數(shù)+2)×40 μL(含有2孔的損失量),。實(shí)驗(yàn)中每一個樣品模板最好重復(fù)做3個以上,。

2. 加樣完成密封好管子后,,請先低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底,再震蕩混勻5 sec以上,,*混勻反應(yīng)液,,再低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底,如有氣泡,,需將氣泡排盡,。

下圖為參考板位

image.png

該示例表示的是檢測6個濃度梯度的DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線、1個無模板對照NTC,、3個陰性質(zhì)控NC,、3個待測樣本、3個加樣回收QC和3個標(biāo)準(zhǔn)品回收QC,。每個檢測做3個重復(fù)孔,。

六、擴(kuò)增程序參數(shù)設(shè)置(兩步法)(以ABI公司7500 qPCR儀,、軟件版本2.0為例)

創(chuàng)建空白新程序,,選擇絕對定量檢測模板。

創(chuàng)建1個檢測探針,,命名為E.coli-DNA,,選擇報(bào)告熒光基團(tuán)為FAM,猝滅熒光基團(tuán)為none,。

Assign target (s) to the selected wells面板中,,將標(biāo)準(zhǔn)曲線孔的Task一欄設(shè)置為Standard,并且在Quantity 一欄分別賦值為300000,、30000,、3000、300,、30(含義為每孔的DNA濃度,,單位為fg/μL),并且在相應(yīng)的sample name一欄中命名為300 pg/μL,,30 pg/μL,,3 pg/μL,300 fg/μL,,30 fg/μL,;將無模板對照NTC孔的Task一欄設(shè)置為NTC;將陰性質(zhì)控NC孔,、待測樣本孔,、樣本QC孔的Task一欄設(shè)置為Unknown,并且在相應(yīng)的Sample Name一欄中命名為NTC,、NC,、YP,、QC,之后點(diǎn)擊 ,。

4. 擴(kuò)增程序設(shè)置:設(shè)置反應(yīng)體積40 μL,。

循環(huán)步驟

溫度(℃)

時間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

95℃

10 min

1

變性

95℃

15 sec

40

退火/延伸(收集熒光)

60℃

30 sec

七、qPCR 結(jié)果分析

Analysis的Amplification Plot面板中,,系統(tǒng)會自動給出Threshold,,有時系統(tǒng)給出的Threshold離基線太近,導(dǎo)致復(fù)孔之間Ct相差甚遠(yuǎn),,可手動調(diào)節(jié)Threshold至合適位置,,點(diǎn)擊Analyze。此時可在Multicomponent Plot初步查看擴(kuò)增曲線的形態(tài)是否正常,。

2. 在Analysis的Standard Curve面板中,,可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率(Slope)、截距(Intercept),、R2,、擴(kuò)增效率(Eff%)。正常的標(biāo)曲,,R2>0.99,;90%≤Eff%≤110%。

3. 在Analysis的View well table面板中,,Quantity一欄可讀取無模板對照NTC,、陰性質(zhì)控NCS、待測樣本,、樣本ERC的檢測值,,單位為fg/μL,后續(xù)可在檢測報(bào)告中將單位換算成pg/μL或pg/mL,。

HB220322





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