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41302ES60HEK293細胞殘留DNA檢測試劑盒
參考價: 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 41302ES60 產(chǎn)品型號
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質
  • 上海市 所在地

訪問次數(shù):512更新時間:2022-07-07 15:57:55

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,,謝謝!
產(chǎn)品簡介
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T
貨號 41302ES60 應用領域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥
主要用途 用于定量分析檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中的Vero殘留DNA含量的試
HEK293細胞殘留DNA檢測試劑盒是用于定量分析檢測各種生物制品的中間品,、半成品和成品中的HEK293宿主細胞DNA殘留片段含量的試劑盒,。
產(chǎn)品介紹

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

價格(元)

HEK293 Host Cell DNA Residue Detection Kit

HEK293宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒

41302ES50

41302ES60

50T

100T

13,695.00

25,285.00

產(chǎn)品描述

HEK293宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒是用于定量分析檢測各種生物制品的中間品,、半成品和成品中的HEK293殘留DNA含量的試劑盒。

本試劑盒采用探針法熒光定量PCR原理,專一快速的檢測HEK293細胞殘留DNA,,其檢測限可以達到fg水平且試劑盒中含有UDG酶,,可以消除擴增產(chǎn)物帶來的污染,。試劑盒本公司的磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒(Cat#18461ES/18462ES)配套使用

產(chǎn)品組分

類別

組分編號

組分名稱

產(chǎn)品編號/規(guī)格

41302ES50(50T)

41302ES60(100T)

Part I

41302-A

HEK293 qPCR mix (UDG plus)

0.8 mL

1.6 mL

41302-B

HEK293 Primer&probe mix

200 μL

400 μL

41302-C

DNA Dilution Buffer

2×2 mL

4×2 mL

Part Ⅱ

41302-D

HEK293 DNA Control(30 ng/μL)

25 μL

50 μL

【注】本試劑盒不含ROX 參比染料,,若您目前使用的Real Time PCR擴增儀需要添加ROX參比染料,,推薦您購買本公司的50× ROX Reference Dye(Cat#10200ES)

運輸和保存方法

1. Part I 組分干冰運輸,,-20℃保存,,有效期1年。

2. Part II 組分干冰運輸,,-80℃保存,,有效期1年。

3. 收到貨后,,請檢查Part I Part II2個組分是否齊全,,并立即放入對應的保存溫度中儲存。

注意事項

1. 使用本試劑前請仔細閱讀本說明書,,實驗應規(guī)范操作,,包括樣本處理,、反應體系的配制及加樣。

2. 加樣和配液步驟盡量都在冰上操作,。

3. 每個組分在使用前都應充分震蕩混勻,,低速離心。

4. 為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。  

5. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

適用機型

包含但不限于以下儀器:

Bio-Rad:CFX96 Optic Module,;

Thermo Scientific:ABI 7500,;ABI Quant Studio 5;ABI Step OnePlus.

使用方法

一,、HEK293 DNA定量參考品的稀釋和標準曲線的制備

用試劑盒中提供的DNA稀釋液DNA定量參考品進行梯度稀釋,,稀釋濃度依次為300 pg/μL、30 pg/μL,、3 pg/μL,、300 fg/μL、30 fg/μL,。

具體操作如下:

1. 將試劑盒中的DNA定量參考品DNA稀釋液置于冰上融化,,待*融化后,輕微振蕩混勻,,低速離心10 sec,。

2. 取6支凈的1.5 mL離心管,分別標記為3 ng/μL,,,,,,,,

3. 在標記為3 ng/μL的1.5 mL離心管中加90 μL DNA稀釋液10 μL DNA定量參考品30 ng/μL),,即稀釋3 ng/μL,,振蕩混勻后短時間快速離心10 sec,該濃度可分裝置于-80℃期保存(不超過3個月),,使用時避免反復凍融,。

4. 在 ,,,,管中先分別加入90 μL DNA稀釋液,,再進行梯度稀釋,,稀釋方法如下:

稀釋管

稀釋比例

終濃度

10 μL 3 ng/μL+90 μL DNA Dilution Buffer

300 pg/μL

10 μL +90 μL DNA Dilution Buffer

30 pg/μL

10 μL +90 μL DNA Dilution Buffer

3 pg/μL

10 μL +90 μL DNA Dilution Buffer

300 fg/μL

10 μL +90 μL DNA Dilution Buffer

30 fg/μL

【注】

1. 每個濃度做3個復孔,,該試劑可測試30 fg/μL-300 pg/μL線性范圍需要,,可適當擴大縮小線性范圍,。

2. 為減少反復凍融次數(shù)和避免污染,建議初次使用時將DNA定量參考品分裝儲存于-80℃,。

3. 已融化未使用的 DNA 稀釋液可保存于2-8 ℃ 7天,,長時間不用請放置于-20℃,。

4. 為確保模板*混勻,,每個梯度稀釋時需輕微震蕩混勻1 min。

二,、樣本回收質控QC的制備

根據(jù)需要設QC中的HEK293 DNA標準品濃度(以制備加3 pg/μL DNA量的樣本加標回收為例),,具體操作如下

1. 100 μL待測樣本加入1.5 mL凈的離心管中,再加入10 μL溶液,,混勻,,標記為回收QC。

2. 回收QC和同批待測樣本一起進行樣本前處理,,制備回收QC純化液,。

三、標準品回收質控QC的制備(可選)

根據(jù)需要QC中的HEK293 DNA標準品濃度(以制備加3 pg/μL DNA量的標準品回收為例),,具體操作如下:

1. 100 μL 溶液加入1.5 mL的離心管中,,標記為標準品回收QC。

2. 標準品回收QC和同批待測樣本一起進行樣本前處理,,制備標準品回收QC純化液。

,、陰性質控NCS的制備

根據(jù)實驗設置陰性質控,,具體操作如下:

1. 100 μL樣本基質溶液DNA 稀釋液加入1.5 mL凈的離心管中,標記為陰性質控NCS,。

2. 陰性質控NCS和同批待測樣本一起進行樣本前處理,,制備成陰性質控NCS純化液。

,、無模板對照NTC的制備

根據(jù)實驗設置無模板對照NTC,,具體操作如下:

1. 無模板對照NTC無需進行樣本前處理,qPCR法檢測殘留DNA含量階段開始配置即可,。

2. 每管或孔中的NTC樣本為20 μL Mix混合液(即16 μL HEK293 qPCR mix + 4μL HEK293 Primer&probe mix + 20 μL DNA Dilution Buffer,,建議配置3個重復孔的量

,、反應體系

組分

體積(μL

HEK293 qPCR mix (UDG plus)

16

HEK293 Primer&probe mix

4

DNA template

20

總體積

40

【注】

1. 根據(jù)反應孔數(shù)計算本次所需的Mix混合液總量:Mix混合液 =(反應孔數(shù)+2)× (16+4) μL(含有2孔的損失量),。通常,,每個樣本做3個重復孔。

2. 加樣完成密封好管子后,,請先低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底,,再震蕩混勻5 sec以上,*混勻反應液,,再低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底,,如有氣泡,需將氣泡排盡,。

下圖為參考板位:

image.png

該示例是對HEK293殘留DNA qPCR法檢測操作的展示,,檢測樣本包括:1個無模板對照NTC、5個濃度梯度的DNA標準曲線,、3個樣本加標回收QC即加樣回收QC),、3個待測樣本3個標準品回收QC(可選),、3個陰性質控NCS1個即可,。建議每個樣本3個重復孔。

,、擴增程序參數(shù)設置(兩步法)(以ABI公司7500 qPCR儀,、軟件版本2.0為例)

1. 創(chuàng)建空白新程序,選擇絕對定量檢測模板,。

2. 創(chuàng)建1個檢測探針,,命名為HEK293-DNA",選擇報告熒光基團為FAM",,猝滅熒光基團為none",。

3. Assign target (s) to the selected wells"面板中,將標準曲線孔的Task"一欄設置為Standard",,并且在Quantity" 一欄分別賦值為300000",、30000"3000",、300",、30"(含義為每孔的DNA濃度,單位為fg/μL),,并且在相應的sample name"一欄中命名為300 pg/μL",、30 pg/μL"3 pg/μL",、300 fg/μL",、30 fg/μL";將無模板對照NTC孔的Task"一欄設置為NTC",;將陰性質控NCS孔,、待測樣本孔,、樣本加標回收QC孔的Task"一欄設置為Unknown",并且在相應的Sample Name"一欄中分別命名為NCS",、TS",、QC",之后點擊Start Run",,開始儀器運行,。

4. 擴增程序設置:設置反應體積40 μL。

循環(huán)步驟

溫度(℃)

時間

循環(huán)數(shù)

擴增產(chǎn)物消化

37 ℃

5 min

1

預變性

95 ℃

10 min

1

變性

95 ℃

15 sec

40

退火/延伸(收集熒光)

60 ℃

60 sec

,、qPCR 結果分析

1. Analysis"Amplification Plot"面板中,,系統(tǒng)會自動給出Threshold,有時系統(tǒng)給出的Threshold離基線太近,,導致復孔之間Ct相差甚遠,,可手動調節(jié)Threshold 至合適位置,點擊Analyze",。此時可在Multicomponent Plot"初步查看擴增曲線的形態(tài)是否正常,。

2. 在Analysis"Standard Curve"面板中,可讀取標準曲線的R2,、擴增效率(Eff%),、斜率(Slope)、截距(Intercept),。正常的標曲R2>0.99,;擴增效率在90%≤Eff%≤110%范圍內Slope在3.4左右,。

3. 在Analysis"View well table"面板中,,Quantity"一欄可讀取無模板對照NTC、陰性質控NCS,、待測樣本TS,、樣本加標回收QC的檢測值,單位為fg/μL,,后續(xù)可在檢測報告中將單位換算成pg/μL或pg/mL,。

HB220518




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