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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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41302ES60HEK293細胞殘留DNA檢測試劑盒
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- 41302ES60 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：512更新時間：2022-07-07 15:57:55
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- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 41302ES60 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 用于定量分析檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中的Vero殘留DNA含量的試 |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
HEK293 Host Cell DNA Residue Detection Kit HEK293宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒 | 41302ES50 41302ES60 | 50T 100T | 13,695.00 |
25,285.00 |
產(chǎn)品描述
HEK293宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒是用于定量分析檢測各種生物制品的中間品,、半成品和成品中的HEK293殘留DNA含量的試劑盒。
本試劑盒采用探針法熒光定量PCR原理，可專一快速的檢測HEK293細胞的殘留DNA,，其檢測限可以達到fg水平；且試劑盒中含有UDG酶,，可以消除擴增產(chǎn)物帶來的污染,。該試劑盒可與本公司的磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒（Cat#18461ES/18462ES）配套使用。
產(chǎn)品組分
類別 | 組分編號 | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | |
41302ES50（50T） | 41302ES60（100T） | |||
Part I | 41302-A | HEK293 qPCR mix (UDG plus) | 0.8 mL | 1.6 mL |
41302-B | HEK293 Primer&probe mix | 200 μL | 400 μL | |
41302-C | DNA Dilution Buffer | 2×2 mL | 4×2 mL | |
Part Ⅱ | 41302-D | HEK293 DNA Control（30 ng/μL） | 25 μL | 50 μL |
【注】：本試劑盒不含ROX 參比染料,，若您目前使用的Real Time PCR擴增儀需要添加ROX參比染料,，推薦您購買本公司的50× ROX Reference Dye（Cat#10200ES）。
運輸和保存方法
1. Part I 組分干冰運輸,，-20℃保存,，有效期1年。
2. Part II 組分干冰運輸,，-80℃保存,，有效期1年。
3. 收到貨后,，請檢查Part I 和Part II共2個組分是否齊全,，并立即放入對應的保存溫度中儲存。
注意事項
1. 使用本試劑前請仔細閱讀本說明書,，實驗應規(guī)范操作,，包括樣本處理,、反應體系的配制及加樣。
2. 加樣和配液步驟盡量都在冰上操作,。
3. 每個組分在使用前都應充分震蕩混勻,，低速離心。
4. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
5. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
適用機型
包含但不限于以下儀器：
Bio-Rad：CFX96 Optic Module,；
Thermo Scientific：ABI 7500,；ABI Quant Studio 5；ABI Step OnePlus.
使用方法
一,、HEK293 DNA定量參考品的稀釋和標準曲線的制備
用試劑盒中提供的DNA稀釋液將DNA定量參考品進行梯度稀釋,，稀釋濃度依次為300 pg/μL、30 pg/μL,、3 pg/μL,、300 fg/μL、30 fg/μL,。
具體操作如下：
1. 將試劑盒中的DNA定量參考品和DNA稀釋液置于冰上融化,，待*融化后，輕微振蕩混勻,，低速離心10 sec,。
2. 取6支潔凈的1.5 mL離心管，分別標記為3 ng/μL,，①,，②，③,，④,，⑤。
3. 在標記為3 ng/μL的1.5 mL離心管中加入90 μL DNA稀釋液和10 μL DNA定量參考品（30 ng/μL）,，即稀釋為3 ng/μL,，振蕩混勻后短時間快速離心10 sec，該濃度可分裝置于-80℃短期保存（不超過3個月）,，使用時避免反復凍融,。
4. 在 ①，②,，③,，④，⑤ 管中先分別加入90 μL DNA稀釋液,，再進行梯度稀釋,，稀釋方法如下：
稀釋管 | 稀釋比例 | 終濃度 |
① | 10 μL 3 ng/μL+90 μL DNA Dilution Buffer | 300 pg/μL |
② | 10 μL ①+90 μL DNA Dilution Buffer | 30 pg/μL |
③ | 10 μL ②+90 μL DNA Dilution Buffer | 3 pg/μL |
④ | 10 μL ③+90 μL DNA Dilution Buffer | 300 fg/μL |
⑤ | 10 μL ④+90 μL DNA Dilution Buffer | 30 fg/μL |
【注】：
1. 每個濃度做3個復孔,，該試劑可測試30 fg/μL-300 pg/μL線性范圍。若需要,，可適當擴大或縮小線性范圍,。
2. 為減少反復凍融次數(shù)和避免污染，建議初次使用時將DNA定量參考品分裝儲存于-80℃,。
3. 已融化未使用的 DNA 稀釋液可保存于2-8 ℃ 7天,，若長時間不用，請放置于-20℃,。
4. 為確保模板*混勻,，每個梯度稀釋時需輕微震蕩混勻約1 min。
二,、樣本加標回收質控QC的制備
根據(jù)需要設置QC中的HEK293 DNA標準品濃度（以制備加3 pg/μL DNA量的樣本加標回收為例）,，具體操作如下：
1. 取100 μL待測樣本加入1.5 mL潔凈的離心管中，再加入10 μL溶液③,，混勻,，標記為加標回收QC。
2. 加標回收QC和同批待測樣本一起進行樣本前處理,，制備加標回收QC純化液,。
三、標準品回收質控QC的制備（可選）
根據(jù)需要設置QC中的HEK293 DNA標準品濃度（以制備加3 pg/μL DNA量的標準品回收為例）,，具體操作如下：
1. 取100 μL 溶液③加入1.5 mL潔凈的離心管中,，標記為標準品回收QC。
2. 標準品回收QC和同批待測樣本一起進行樣本前處理,，制備標準品回收QC純化液。
四,、陰性質控NCS的制備
根據(jù)實驗設置陰性質控,，具體操作如下：
1. 取100 μL樣本基質溶液（或DNA 稀釋液）加入1.5 mL潔凈的離心管中，標記為陰性質控NCS,。
2. 陰性質控NCS和同批待測樣本一起進行樣本前處理,，制備成陰性質控NCS純化液。
五,、無模板對照NTC的制備
根據(jù)實驗設置無模板對照NTC,，具體操作如下：
1. 無模板對照NTC無需進行樣本前處理，在qPCR法檢測殘留DNA含量階段開始配置即可,。
2. 每管或孔中的NTC樣本為20 μL Mix混合液（即16 μL HEK293 qPCR mix + 4μL HEK293 Primer&probe mix） + 20 μL DNA Dilution Buffer,，建議配置3個重復孔的量。
六,、反應體系
組分 | 體積（μL） |
HEK293 qPCR mix (UDG plus) | 16 |
HEK293 Primer&probe mix | 4 |
DNA template | 20 |
總體積 | 40 |
【注】：
1. 根據(jù)反應孔數(shù)計算本次所需的Mix混合液總量：Mix混合液 =（反應孔數(shù)+2）× (16+4) μL（含有2孔的損失量）,。通常,，每個樣本做3個重復孔。
2. 加樣完成密封好管子后,，請先低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底,，再震蕩混勻5 sec以上，*混勻反應液,，再低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底,，如有氣泡，需將氣泡排盡,。
下圖為參考板位：
該示例是對HEK293殘留DNA qPCR法檢測操作的展示,，檢測樣本包括：1個無模板對照NTC、5個濃度梯度的DNA標準曲線,、3個樣本加標回收QC（即加樣回收QC）,、3個待測樣本、3個標準品回收QC（可選）,、3個陰性質控NCS（1個即可）,。建議每個樣本做3個重復孔。
七,、擴增程序參數(shù)設置（兩步法）（以ABI公司7500 qPCR儀,、軟件版本2.0為例）
1. 創(chuàng)建空白新程序，選擇絕對定量檢測模板,。
2. 創(chuàng)建1個檢測探針,，命名為“HEK293-DNA"，選擇報告熒光基團為“FAM",，猝滅熒光基團為“none",。
3. 在“Assign target (s) to the selected wells"面板中，將標準曲線孔的“Task"一欄設置為“Standard",，并且在“Quantity" 一欄分別賦值為“300000",、“30000"、“3000",、“300",、“30"（含義為每孔的DNA濃度，單位為fg/μL）,，并且在相應的“sample name"一欄中命名為“300 pg/μL",、“30 pg/μL"、“3 pg/μL",、“300 fg/μL",、“30 fg/μL"；將無模板對照NTC孔的“Task"一欄設置為“NTC",；將陰性質控NCS孔,、待測樣本孔,、樣本加標回收QC孔的“Task"一欄設置為“Unknown"，并且在相應的“Sample Name"一欄中分別命名為“NCS",、“TS",、“QC"，之后點擊“Start Run",，開始儀器運行,。
4. 擴增程序設置：設置反應體積40 μL。
循環(huán)步驟 | 溫度（℃） | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
擴增產(chǎn)物消化 | 37 ℃ | 5 min | 1 |
預變性 | 95 ℃ | 10 min | 1 |
變性 | 95 ℃ | 15 sec | 40 |
退火/延伸（收集熒光） | 60 ℃ | 60 sec |
八,、qPCR 結果分析
1. 在“Analysis"的“Amplification Plot"面板中,，系統(tǒng)會自動給出Threshold，有時系統(tǒng)給出的Threshold離基線太近,，導致復孔之間Ct相差甚遠,，可手動調節(jié)Threshold 至合適位置，點擊“Analyze",。此時可在“Multicomponent Plot"初步查看擴增曲線的形態(tài)是否正常,。
2. 在“Analysis"的“Standard Curve"面板中，可讀取標準曲線的R2,、擴增效率（Eff%）,、斜率（Slope）、截距（Intercept）等,。正常的標曲：R2＞0.99,；擴增效率在90%≤Eff%≤110%范圍內；Slope在3.4左右,。
3. 在“Analysis"的“View well table"面板中,，“Quantity"一欄可讀取無模板對照NTC、陰性質控NCS,、待測樣本TS,、樣本加標回收QC的檢測值，單位為fg/μL,，后續(xù)可在檢測報告中將單位換算成pg/μL或pg/mL,。
HB220518
